食品卫生菌落总数检验技术.doc

食品卫生菌落总数检验【相关支撑知识】 1. 定义(1) 菌落总数: 样品经过处理, 在一定条件下培养后( 如培养基成分、培养温度和时间、 pH、需氧性质等), 所得 1mL(g) 检样中所含菌落的总数。所得结果包括一群在方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧和兼性厌氧菌。每种细菌都有一定的生理特性,培养时只有分别满足不同的培养条件( 如培养温度、培养时间、 pH、需氧性质等), 才能将各种细菌培养出来。但在实际工作中,细菌菌落总数的测定一般都只用一种常见方法,即平板活菌计数法,因而并不能测出每克或每毫升中的实际总活菌数,如厌氧菌、微嗜氧菌和嗜冷菌在此条件下不生长,有特殊营养要求的一些细菌也受到了限制,因此所得结果, 只反映一群在普通营养琼脂中发育的、嗜温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。此外,菌落总数并不能区分细菌的种类,所以有时被称为杂菌数或需氧菌数等。食品检样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在, 因而在平板上出现的菌落可以来源于细胞块, 也可以来源于单个细胞, 因此平板上所得需氧和兼性厌氧菌菌落的数字不应报告为活菌数, 而应以单位质量、容积或表面积内的菌落或菌落形成单位数( colony forming units , CFU ) 报告之。 2. 卫生学意义(1 )判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。(2 )及时反映食品加工过程是否符合卫生要求,为被检食品卫生学评价提供依据。(3 )通常认为,食品中细菌数量越多,则可考虑致病菌污染的可能性越大,菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。【材料准备】 1. 设备及材料: 恒温培养箱( 36 ℃± 1℃, 30 ℃± 1℃)、冰箱(2℃~5℃)、恒温水浴箱( 46 ±1℃) 、天平(感量为 ) 、均质器、振荡器、无菌吸管( 1mL 、 10mL 或微量移液器及吸头)、无菌锥形瓶( 容量 250mL 、 500mL )、试管( 无菌培养皿( 直径 90mm )、 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸、放大镜或菌落计数器。 2. 培养基和试剂: 平板计数琼脂培养基、磷酸盐缓冲液、无菌生理盐水、 1mol/L 氢氧化钠、 1mol/L 盐酸。【任务实施】检样 10 倍系列稀释选择 2~3 个适宜样品匀液,各取 1mL 分别加入无菌培养平皿内每皿内加入 15mL ~ 20mL 平板计数琼脂培养基, 混匀培养计数各平板菌落数计算菌落总数报告图 4-1-2 菌落总数检测程序 1. 样品的稀释(1 )固体和半固体样品:称取 25g 预处理样品置至盛有 225mL 磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内, 8000r/min ~ 10000 r/min 均质 1min ~ 2min ,或放入盛有 225mL 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1min ~ 2min ,制成 1:10 的样品匀液。(2) 液体样品: 以无菌吸取 25mL 预处理样品置盛有 225mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成 1: 10 的样品匀液。(3)用 1mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1mL , 沿管壁缓慢注于盛有 9mL 稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面) ,振摇试管或换用 1 支无菌吸