药用真菌灰树花深层发酵技术及其抗肿瘤多糖的研究.pdf

无锡轻工业大学
博士学位论文
药用真菌灰树花深层发酵技术及其抗肿瘤多糖的研究
姓名：陈石良
申请学位级别：博士
专业：油脂与植物蛋白工程
指导教师：谷文英;陶文沂

摘要／对灰树花深层发酵产物与其子实体的主要营养成分包括多糖进行了比较研采用紫外连续诱变方法，从现有菌种中筛选出一株遗传上相对稳定的适应液业化生产，深入开发这一珍贵食药用菌资源，本论文对灰树花深层发酵菌种的选育、发酵工艺条件的优化、胞内胞外多糖的提取纯化与结构分析及其抗肿瘤究。＼结果表明，采用液态发酵法获取的菌丝体具有与子实体相似的营养组成，粗多糖含量是子实体的倍，其蛋白质含量和水解氨基酸总量均高于子实体。此外，发酵上清液中还含有丰富的胞外多糖和游离氨基酸。体培养的灰树花菌株——，该菌株在泵嫔仙に俣瓤欤な仆ⅰ在液体培养基中发酵生长力较强，菌丝干重与多糖产量较出发菌株得到明显提中麦芽糖、葡萄糖和玉米粉是其适宜碳源，而酵母膏、牛肉膏和麸皮是其优质氮源。、”和可促进菌丝生长及胞外多糖的分泌，玉米浆则是菌丝体生长的一个较重要的刺激因子。正交实验进一步确定了灰树花深层培养的适宜培养基组成为：テ咸烟牵．ビ衩追郏．ヴ锲し郏．ソ湍父啵．ビ衩捉％，％．％摇瓶发酵条件试验确定了灰树花适宜摇瓶培养条件为：培养基起始，瓶，培养。在上述条件下，每发酵液可获得干菌丝体．和胞外多糖＠发酵罐进行放大试验，结果表明，培养后，发酵液稠厚，呈棕黄色，具有水果香味，菌丝干重达．／舛嗵谴．／摇瓶培养情况相似。对灰树花发酵多糖的提取工艺条件进行了优化研究。单因子试验结果表明，溶液作进一步浸提。响应面分析确定碱提取的最佳条件为碱浓度疞，浸灰树花是近年开发出来的一种珍稀食药两用真菌。灰树花多糖具有明显的抗肿瘤、抗《尽⒏纳泼庖呦低彻δ堋⒔笛Q埂⒔笛L堑裙πВ且恢掷想的生物反应调节剂Ｎ?7⒁禾迳畈惴⒔图际酰涌旎沂骰ù蠊婺９免疫活性的检测等方面进行了系统的研究。高。碳、氮源是影响液体培养灰树花菌丝生长及胞外多糖产量的显著因子。其培养温度℃，接种量％，摇瓶转速／耙毫课猯／灰树花菌丝体水溶性多糖的最佳提取条件为匀浆菌丝体按料水比加水，在～℃水浴中漫提，共危崛∫壕ㄋ酰尤倍体积％乙醇沉淀。在此条件下，粗多糖得率为％左右跃扛芍丶。水提后的残渣用提温度℃，浸提时间诖颂跫拢嗵堑寐士纱．痩删无锡轻工大学博士学位论文中文摘要第Ⅳ一
免疫调节卡胞外多糖，其得率为疞发酵液。凝胶过滤色谱结合起来进行灰树花多糖分级分离，结果表明灰树花菌丝体水溶多糖也包含鲎榉荩灾行宰榉軬—为主，占总量的％。经薄层层析、高效液相色谱、狝一>蛔榉帧—难溶于水，但可溶于，比旋光度薄虶—均无核酸和蛋白质特征吸收峰。高压液相色谱法测定狟一狝一闹鼐肿恿糠直鹞蚝．颉Ｗ酆掀嗌住⒑焱夤馄住⒑舜—一糖苷键连接成主链，并含有一—、癇一—糖苷键相连的侧链。狟一且恢謖一型吡喃葡聚糖，含有—糖苷键。捎敫展煨纬山衔榷ǖ穆绾衔铮硐殖鲎畲笪詹ǔ的特征变化；同时在谱中出现明显的有序结构信息，这表明在溶液中存在螺旋构象，维持其有序构象的力可能以氢键力为主。抗肿瘤活性，其抑瘤率分别为．％和．ァ；沂骰ǘ嗵腔鼓茉黾有∈的免疫力。急性毒性实验结果表明，灰树花发酵液及发酵多糖安全无毒或毒性很小。多糖对小鼠的最大安全量为／以上，发酵浓缩液对小鼠的最大安全灰树花药用真菌深层发酵真菌多糖分离纯化跃扛芍丶。以短寤ヒ掖迹。条件下醇析提取采用蛋白酶联合脱除杂蛋白，悍ㄍ焉ǎ肝龇ㄍ蜒蔚确椒ǘ灰树花多糖粗品进行了初步纯化。将—阄龊蚐性多糖含有鲎榉荩运嵝宰榉軬—为主，占总量的％。发酵液胞外采用化学发光法在体外对灰树花粗多糖及经分离纯化得到的糖组份进行了免疫活性检测。结果证明，两个大量组份狟一虶一哂邢灾脑强细胞免疫活性功能，其他微量级份的功效不明显或无免疫活性。阄霾舛ǎ珿—和’；狝一兹苡谒刃舛萚Ⅱ’。紫外扫描测定，狟一共振的检定结果表明，狝一且恢钟善咸烟亲槌傻倪拎暇厶牵訠一动物体内实验证明灰树花发酵液粗多糖和发酵菌丝体粗多糖均具有明显的免疫器官脾脏的重量，增加小鼠腹腔墒浚銮縈由的吞噬功能，提高机体关键词：结构分析抗肿瘤剂量为／以上。化学发光／第Ⅳ～无锡轻工大学博士学位论文中文摘要
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