显微镜直接计数法.doc

: .
血球计数板计数法
利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。 将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下 进行计数。由于计数室的容积是一定的（伽 3），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成
单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。
血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔 成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室， 微生物的计数就在计数室中进行。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小 方格，共 400 小格；另一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又分成 16 个小方格，总共也 是 400 小格。所以无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的。
每一个大方格边长为1伽，则每一大方格的面积为 1伽2,盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高 度为伽，所以计数室的容积为伽 3。其计算方法如下：
X 25的计数板计算公式
细胞数/ml=（100小格内的细胞数/100） X 400X 1000X稀释倍数
2. 25X 16的计数板计算公式
细胞数/ml=（80小格内的细胞数/80） X 400X 1000X稀释倍数
器材 酵母菌悬液，血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管等。
操作步骤
1. 稀释：将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。
2. 镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3. 加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片 边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。 注意不可有气泡产生。静置 5—10分钟即可计数。
4. 显微镜计数：将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高 倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每
小格内约有5