铅诱导hk-2细胞凋亡及其机制分析研究.pdf

铅诱导HK-2细胞凋亡及其机制研究研究生:金文达导师:陈锋教授专业:卫生毒理学中文摘要目的: 探讨铅是否诱导人肾近㈣小管上皮细胞()凋亡,并进一步研究铅诱导HK一2细胞凋亡的途径,为颅防和治疗铅性肾病提供实验依据和理论基础。方法: 以不同浓度的铅(0、50、100、200、400/zmol/L) 作量效分析;以400¨mol/(0、12、24、48h)作时效分析;平板克隆实验法检测细胞活力;Hochest33258荧光染色检测细胞凋亡形念学改变;(FITC)/PI叔染法结合流式细胞仪分析细胞凋亡率;、.8、.9(、.8、.9)的活性变化;流式细胞仪检测检测细胞色素C(Cyt C)的释放;Western bolt检测caspase一3、-9、bcl一2、 bax蛋白的表达。。结果: :,随着铅浓度的增高及染毒时间的延长,细胞生长活力越低p<,p<); 、胞浆浓缩、核染色质聚集、核固缩、核碎裂等典型的凋亡形态学改变; 。50、100、200、400Hmol/L 铅染毒48h后,%±%、%±%、%± %、%±%,400Hmol/L染毒12、24、48h后,%± %、%±%、 o“-%p<,p<): C从线粒f本释放入胞浆,释放量‘一剂量依赖性和时间依赖性增高p<,p<); 、caspase一9的活性增强p<,p<), 的活性卮明显影响; , ; 并抑制铅诱导 ,、caspase-9表达增高,bcl一2蛋白表达降低,bax蛋白表达增高。结论: ,铅·; -2细胞凋1’:: ’I、:,导致 Cyt C的释放,激活caspase一9,再激活caspase一3,进而引起caspase酶依赖性细胞凋亡; , 的表达。关键词:铅;;细胞凋亡;;bax IV Lead Induced Apoptosis InHuman renal proximal tubular epithelial Cells(HK一2)And ItsMechanism Abstract objective: To observe theinjure ofhum an proximal renal tubular epithelialcells(HK-2)by lead,and study theapoptotic pathways that are initiatedby lead. Methods: were cultured under 5%C02 and 95%air in an incubator setat37*(2,and exposed tovarious concentrations ofleadacetate(0,50,100,200,400/zmol/L)for 48 hours;HK一2were treated with 400/tmol/L lead acetate for 0,12,24,48 viability ofcellswere mediated by colony formation cellapoptosis was determined by nuclear staining with Hoechst33258,flow cytometric analysis with Annexin—V(FITC)and Propidium Iodide(P1).Activity of caspase一3,一8,-9 was determined by colorimetric c(Cty c)rele