谷光甘肽.doc

报名编号: 吉林省高等教育自学考试吉林大学生物制药专业本科毕业设计设计题目: 设计作者: 准考证号: 通信地址: 联系电话: 吉林大学生命科学学院 2011 年 7月 10日目录第一章前言………………………………………………………………… 1 第一节谷胱甘肽化合物的概述…………………………………….2 第二节谷胱甘肽生产方法…………………………………………..2 第二章实验材料与方法……………………………………………..4 第一节实验材料……………………………………………………...4 第二节实验方法……………………………………………………… 5 第三章实验内容……………………………………………………….8 第四章总结…………………………………………………………….提要以含有 r- 谷氨酰半胱氨酸合成酶(GSH-I) 和谷胱甘肽合成酶(GSH- Ⅱ)的 472c 酵母菌株为酶源, 以谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸为底物, 酶法制备谷胱甘肽(GSH) 工艺的研究。采用了直接高效液相色谱法检测酶促反应中 GSH 的含量, 建立了酶促反应的最佳反应条件。在优化反应条件下, 对底物半胱氨酸的转化率为 80% , 经过分离纯化回收率为 83%, 总产率为 %。结果表明, 该法制备 GSH 成本低, 工艺过程简单, 能够适用于 GSH 的工业化生。 Study on Enzymatic Synthesis of glutathione tao Rui, Wu Wutong, Xu Jiyang(Department of Biochemistry, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009) Abstract A simple and economical method of enzymatic synthesis of Glutathione was developed. glutathione was produced by means of the biotransformation of L-Glutamic -Cysteine and Glycine in the presence of yeast cell of emuls efier E 472 c. The analytical method of determine GSH and GSSG with HPLC was founded and as eries reaction conditions were optimized. Under this condition, the transformation rate can approach 80% with a mole yield of 82%. Key Words Enzymatic synthesis, Glutathione, Direct HP LC, optimization 关键词: 酶法谷胱甘肽直接高效液相法优化第一章前言第一节谷胱甘肽化合物的概述谷胱甘肽是由谷氨酸, 半胱氨酸和甘氨酸形成的三肽化合物, 分为还原型( GSH ) 和氧化型(GSSG), 广泛存在于生物体内, 是主要的抗氧化剂, 对细胞具有多种生化作用。临床用于中毒性肝炎和感染性肝炎的治疗[ 1-2 ], 抑制白内障以及角膜与视网膜疾病的改善[3], 有机物及重金属的解毒, 癌症辐射和化疗的保护[ 4-6 ] ,对肺纤维化、肝癌、卵巢癌、艾滋病也是有益的联合用药[ 7-9 ] ,亦广泛用于食品加工业, 化妆品工业等。第二节谷胱甘肽的生产方法谷胱甘肽的生产方法很多, 如化学合成法, 提取法, 基因工程法, 酶法[ 10]等。由于酶促反应具有催化专一性强, 反应条件温和, 转化效率高等优点, 因此国际上多采用此法生产。其反应过程如下: C ys ADP Gly ADP ++++ ATP Pi ATP Pi Glu r-Glu-Cys r-Glu-Cys-Gly GSH-I GSH-II 本实验室已通过菌种筛选得到一种含有 r- 谷氨酰半胱氨酸合成酶( GSH-I )和谷胱甘肽合成酶( GSH- Ⅱ)的 菌株,故采用酵母细胞酶促反应制备 GSH ,着重建立了快速准确的高效液相含量检测法及确定了影响酶活各因素的最优化条件, 为实现生物转化 GSH 的产业化提供了基础。第二章实验材料与方法第一节实验材料 菌种 472c. 酵母菌株 仪器及实验材料高效液相色谱仪 HP1050