免疫沉淀类试验双扩免疫比浊.ppt

免疫沉淀类试验双扩免疫比浊
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沉淀反应（precipitation）
是可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合所出现的沉淀现象。
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分类
液体内沉淀试验
絮状沉淀试验
环状沉淀试验
免疫浊度测定
凝胶内沉淀试验
免疫扩散
免疫电泳
单向免疫扩散试验
双向免疫扩散试验
火箭免疫电泳
对流免疫电泳
沉淀反应
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沉淀反应的特点
抗原为可溶性物质，如蛋白质、多糖
沉淀反应分两个阶段：
第一阶段、抗原抗体特异性结合
第二阶段、形成可见的免疫复合物
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免疫浊度测定
经典的沉淀试验有4个缺点无法克服：
操作繁琐
敏感度低（10～100μg/ml）
时间长
难以自动化
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（一）免疫浊度分析的基本原理：
抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免疫复合物(<19S)，在增浊剂(如PEG、NaF等)的作用下，迅速形成免疫复合物微粒(>19S)，使反应液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合物量随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。用一系列已知浓度的抗原标准品同时进行试验，制备剂量反应曲线，即可计算出标本中抗原的含量
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（二）类型
透射免疫比浊法
散射免疫比浊法
免疫胶乳比浊法
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1 透射免疫比浊法
原理：
抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物(IC)，当光线透过反应溶液时，由于溶液内复合物粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减少，免疫复合物量越多，透射光越少，即光线吸收越多，可用吸光度表示。吸光度和复合物的量成正比，当抗体量固定时，与待检抗原量成正比。用抗原标准品建立标准曲线，可测出待检抗原含量。
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方法评价：
优点：
① 灵敏度比单扩法高5—10倍；
② CV小于10％；
③ 操作简便快速，1h可报告结果；
④ 结果准确，且能用全自动化或半全自动化仪器进行分析，尤其随着胶乳粒子增强浊度测定法的出现，使敏感度提高，其应用更加广泛。
缺点：
抗体用量较大；
检测需抗原抗体反应达到平衡，耗时较长；
不宜用于药物等半抗原的测定；
灵敏度较散射比浊法低。
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