AGP柱的使用说明.doc

CHIRAL-AGP 操作说明安装 出货溶剂为 15% 异丙醇蒸馏水溶液。首先用蒸馏水冲洗, 开始流速较低, 然后慢慢增加到 ,并维持 2mins ,随后流速增加到 - 时保持 10min ,使用流动相平衡色谱柱,推荐流速为 - 。为了保护分析柱不被高亲和力和颗粒杂质污染, 推荐使用保护柱, 且必须定期更换保护柱, 否则将影响分析柱的性能,用于生物分析时尤为重要。保存色谱柱室温保存。使用时, 可以在色谱系统中过夜。但是当缓冲盐中没有有机改性剂, 或者有机溶液中含有低浓度乙腈时,必须非常小心,因为在这样的流动相中微生物生长迅速。所以流动相必须现场配制。周末或者短期保存,可将色谱柱置于 10% 异丙醇的蒸馏水中。长时间的保存,请保存在 15% 的异丙醇蒸馏水中,使用前,请重复操作上面的安装步骤。流动相组成缓冲液使用不同种类的缓冲液能得到最好的分离效果, 比如: 磷酸钠或磷酸钾缓冲液, 乙酸铵或乙酸钠缓冲液,甲酸甲酯或柠檬酸缓冲液。推荐浓度范围 - ,正常: 10-20mM 。 pH 色谱柱 pH 范围: 4-7 , pH 值长时间的大于 7 或者小于 4 ,都可能缩短色谱柱寿命,导致二氧化硅分解。有机改性剂推荐使用下列有机改性剂: 1- 丙醇, 异丙醇, 甲醇, 乙醇和乙腈, 丙醇和异丙醇及乙腈是使用最频繁的有机改性剂。无电荷改进剂的类别和浓度对分离因子的影响很大。如: 1- 丙醇, 异丙醇和乙腈在异构体选择性方面有很大的不同, 见方法开发部分。使用阳离子和阴离子改性剂也能调整保留时间和异构体选择性。但是, 由于对基体的高亲和力, 有些改性剂很难全部洗脱, 这样, 可能影响色谱柱的性能。我们推荐使用无电荷的、阴离子的、阳离子的改性剂。室温范围 20-25 ℃, 但是色谱柱也能在高于或低于该温度下使用, 然而当色谱柱使用温度过高时,对所有硅胶基色谱柱,都将缩短色谱柱寿命。样品当进样针体积为 10-20 μL 时,推荐的样品浓度低于 ,如果可能,将样品溶解在流动相中, 如果样品在流动相溶解性不好, 加一些高浓度的有机溶剂改性剂, 但是有机改性剂的浓度太高, 小心引起缓冲盐析出沉淀。避免将样品溶在有机溶剂中。不要注射不干净的样品或者样品中包含有未溶解化合物。在生物分析过程中,使用分离技术过滤样品溶液,定期更换保护柱。清洗色谱柱如果色谱柱被疏水性原料污染了, 将色谱柱反过来( 不接检测器),用 25% 的异丙醇蒸馏水溶液冲洗一个晚上,流速 。方法开发( UV 检测器) 样品特征和最初的流动相化合物类型最初流动相疏水性化合物 10mM 醋酸铵或醋酸钠缓冲液, 亲水胺, 弱酸( 苯酚等), 非质子类(胺,酯, 醇等) 5% 的异丙醇 10mM 磷酸钠缓冲液, 强酸(羧酸) 10mM 磷酸钠缓冲液, 如果化合物包含一些官能团,按照质子官能团确定使用下列哪种方法疏水性胺:根据最初流动相得到的结果,请按下列流程保留时间和异构体选择性没有或低异构体选择性,低保留时间异构体选择性和保留时间都高高保留时间,无异构体选择性 pH 值或无电荷改进剂的优化。逐渐增加 pH 值,用异丙醇调整保留时间