生化技术知识整理.ppt

生化技术知识整理
第一页，共30页
*
当试样由载气携带进入色谱柱与固定相接触时，被固定相溶解或吸附
随着载气的不断通入，被溶解或吸附的组分又从固定相中挥发或脱附
挥发或脱附下的组分随着载气向前移动时又再次被固定相溶解或吸附
随着载气的流动，溶解、挥发，或吸附、脱附的过程反复地进行。
第二页，共30页
*
分配系数 K
组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、挥发的过程叫做分配过程。在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的浓度（单位：g / mL）比，称为分配系数，用K 表示，即：
第三页，共30页
*
分配系数 K的讨论
一定温度下，组分的分配系数K越大，出峰越慢；
试样一定时，K主要取决于固定相性质；
每个组份在各种固定相上的分配系数K不同；
选择适宜的固定相可改善分离效果；
试样中的各组分具有不同的K值是分离的基础；
某组分的K = 0时，即不被固定相保留，最先流出。
第四页，共30页
*

气相色谱：流动相为气体（称为载气）。
按分离柱不同可分为：填充柱色谱和毛细管柱色谱；
按固定相的不同又分为：气-固色谱和气-液色谱
第五页，共30页
*
3 气相色谱基本概念
（1）有关色谱图的定义
色谱图：检测器响应信号随时间变化的曲线。也叫流出曲线。
基线：没有进样时，只有载气通过检测器，记录仪记下的曲线。
色谱峰：色谱柱流出物通过检测器时所产生的信号曲线。
峰底：连接峰起点到终点间的距离。
第六页，共30页
*
峰高：流出曲线
最大值到峰底的距离。
峰宽（W）：峰两侧
拐点处所作切线与峰底相交两点间的距离。
半峰宽（W1/2）：峰高一半处峰的宽度。
峰面积（A）：峰与峰底围成的面积。
保留时间（tr）：组分从进样到出现峰最大值时所需时间。
第七页，共30页
*
气相色谱流出曲线
1).基线
无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线。
2).保留值
（1）时间表示的保留值
保留时间（tr）：组分从进样到柱后出现浓度极大值时所需的 时间
死时间（tr0）：不与固定相作用的气体（如空气）的保留时 间。
调整保留时间（tr ＇）：tr＇= tr－tr0
第八页，共30页
*
续
色谱曲线的用途：
（1）根据色谱峰的位置（保留值）可以进行定性的分析.
（2）根据色谱峰的面积可以进行定量分析.
（3）根据色谱峰的位置及其宽度，可以对色谱柱分离情况进行评价。
第九页，共30页
*
两相邻组分在不同色谱条件下的分离情况：
(a) 两峰间仅有一定的距离，而每个峰却很宽，致使彼此重叠，两组分不能完全分离。
（b)两峰间有既有一定的距离，且每个峰却很窄，致使彼此峰不重叠，两组分能完全分离。
续
第十页，共30页