高效液相色谱法.ppt

高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法?经典液相色谱法为基础?引入气相色谱法的理论和实验技术?高压输送流动相?高效固定相及高灵敏度检测器?现代液相色谱分析方法。概述?高效液相色谱法与经典液相色谱法经典液相柱色谱装置高效液相色谱仪 3-10 μm高压泵快(1-10mL/min) 150-200 μm 重力或低压泵很慢固定相粒径流动相驱动方式流动相流速 HPLC 经典液相色谱例:分离 20种氨基酸柱长: 170 cm 柱径: cm F:30 mL/h t 分离: >20 h 经典柱色谱 HPLC t 分离:1 h 与气相色谱法相比与气相色谱法相比?不受试样的挥发性和热稳定性的限制,应用范围广; ?可选用各种溶剂作为流动相,对分离的选择性有很大作用,选择性高; ?一般在室温条件下进行分离,不需要高柱温。基本理论一色谱柱柱效的基本关系式 2 22/1'16 '54 .5????????????????W tW tn rr eff eff effn LH?二分离度?????????????? 1,2 1,2 21 1214)( )(2r r nWW ttR eff rr三速率方程 Cu u BAH????? MD B??20?u B 在大多数情况下, 溶质在液相流动相中的扩散系数,约为气相中扩散系数的万分之一 Cu AH??流动相流速对板高的影响 1)小颗粒填料,填充均匀; 2)选择较低的流动相流速; 3)选择粘度小的溶剂作流动相,改善传质。修正的速率方程: 提高柱效途径高效液相色谱分离方法一吸附色谱法 1分离原理 nad nad adSX SXK] ][[ ] ][[? X+ nS adX ad+ S nK ad值越大,保留时间越长。 2固定相硅胶-强极性氧化铝-弱极性活性炭-非极性分子筛-强极性高分子多孔微球(GDX) 固体吸附剂硅胶表面结构