实验七 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定.ppt

酵母核糖核酸的分离及组份鉴定酵母核糖核酸的分离及组份鉴定实验七生物化学实验一实验目的 RNA 的基本原理及方法。 RNA 的化学组成及定性鉴定的原理与操作过程。生物化学实验二实验原理实验室: 工业生产: 核酸提取方法(有活性的) (无活性的) 苯酚法去污剂法盐酸胍法稀碱法---本实验浓盐法生物化学实验组织匀浆用苯酚处理并离心后, RNA 即溶于上层被酚饱和的水相中, DNA 和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后, RNA 即以白色絮状沉淀析出,此法能较好的除去 DNA 和蛋白质。浓盐法使用 10% 左右氯化钠溶液, 90℃提取 3-4h ,迅速冷却,提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀 RNA 。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解,然后用酸中和,除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀 RNA 。二实验原理生物化学实验酵母含 RNA 达 -% ,而 DNA 含量仅为 -% ,为此,提取 RNA 多以酵母为原料。酵母中的核糖核酸可溶于碱,在碱提取液中加酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀,由此得到粗核糖核酸。核糖核酸含有核糖,嘌呤碱,嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在。二实验原理生物化学实验鉴定方法: (1) 磷酸与定磷试剂作用能产生蓝色的钼蓝沉淀。(2) 核糖与地衣酚试剂反应呈鲜绿色。(3) 嘌呤碱与硝酸银产生白色的嘌呤银化合物沉淀。嘌呤碱的糖苷键比嘧啶碱的糖苷键易于水解二实验原理生物化学实验仪器:试管;试管架;烧杯;移液管; 量筒;滴管;水浴锅; 离心机;离心管;锥形瓶。原料:干酵母粉试剂: (1) /L氢氧化钠溶液; (2)酸性乙醇溶液; (3) /L硫酸; (4) 硝酸银溶液; (5)1mol/L 浓氨水; (6)三氯化铁-浓盐酸溶液; (7)苔黑酚乙醇溶液; (8)抗坏血酸; (9)钼酸铵试剂。三仪器、原料和试剂生物化学实验四操作步骤(一) 酵母 RNA 的提取(1)将 2g酵母悬浮于 10ml mol /L氢氧化钠溶液中; (2)在沸水浴上加热 30分钟后,将匀浆液转移至 10ml 离心管中,冷却。配平离心(3000r /min)15 分钟; (3)将上清液缓缓倾人盛有 4ml 酸性乙醇溶液