细胞周期同步诱导方法.doc

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ＤIＡMＯNDS Delｉvｅｒabｌｅ 1-．3
Ｓｔatｅ－of-the－aｒt in humａｎ ｃｅlｌ synｃhronｉｚatiｏｎ．
ＤIAMONDS ＰARTＮER: Ｋristiａn Heliｎ，
Ｂiotecｈ Ｒesearch ａｎd　Iｎｎｏvａtion　Cenｔｒe (ＢＲＩC)， Uｎｉｖｅｒsitｙ　ｏｆ Cｏｐenhａgen , Ｄｅnmark
Synｃhronizatioｎ ｐrotｏcｏls　for　huｍan ｃells
I．） Doubｌｅ Tｈｙmidine block　（ｅaｒｌｙ　Ｓ－ｐhasｅ　bloｃk)
at 25-３０% ｃoｎfｌuｅncy　of ＨeＬa　cell cｕlture wash　ｔwice　ｗith　1xPＢS ａnｄ aｄd DMEM (10%FＣＳ,　1％ Ｐeｎ-Sｔreｐ, 1% Gｌｕtamine)　+ 2mM　Ｔhｙｍidiｎｅ foｒ １8 h (first bloｃk)
aｆter　firｓt Thymｉdine ｂlock: reｍｏve Tｈyｍｉdiｎe　ｂy ｗａshing witｈ　１xPBＳ;
adｄ fresｈ DＭEM （１0%FＣS, 1% Pen-Sｔreｐ， １%　Glｕtamiｎe) for 9h ｔｏ　reｌeasｅ　ceｌｌｓ
ﻩ 　
ａｆｔer releasing：　ａdｄ DＭEM （１0%FＣＳ, 1％ Ｐｅｎ－Strep, 1%　Gluｔａmｉｎｅ) +　２ｍM Tｈｙmｉdine foｒ　1７ h　（ｓｅcｏｎd blocｋ)
ａfteｒ　ｓeｃond blｏcｋ： rｅｍｏve　Tｈymｉｄine ｂy　wａsｈｉng　wｉｔh　1xＰＢS; reｌeasｅ　ceｌlｓ　bｙ ａdding　fｒｅsh ＤMEＭ (１0％FCS，　1% Ｐｅn-Streｐ， １% Glｕｔamine)　
ﻩ　 　 Þ cellｓ　progrｅsｓ sｙｎcｈronoｕslｙ tｈroｕgh Ｇ2- and　mｉtｏtｉc pｈasｅ
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Fｉｇｕre Ａ．   Sｙnｃｈrony ｏf　ＨeLａ ｃeｌlｓ． （A)　Ｃｅlls ｗｅre　ａｒｒesｔeｄ ａt　thｅ ｂｅｇｉnｎｉng　ｏf S ｐhaｓｅ　bｙ　ｕsiｎｇ a　double ｔｈymidiｎｅ　block,　and　ceｌｌ　syｎｃｈroｎy wａｓ　moｎｉtｏｒed bｙ flow cyｔoｍｅtry of　ｐrｏｐidiｕm　iｏdide-ｓtained　ceｌｌｓ． Flｏw ｃytomeｔry　ｄaｔa wｅｒe　cｏｌlｅｃteｄ for eａch of tｈe ｔhｒee iｎdepｅｎｄｅnｔ　ｄoｕble ｔｈymidｉne　bｌocks peｒｆormed　in this sｔuｄy； ｄａｔa arｅ shown onｌy fｏｒ tｈe　ｓｅｃond　doubｌｅ ｔｈyｍｉｄine arresｔ (Thy-Ｔｈy２), ａｌthough　ｅqｕiｖaｌeｎｔ syｎchrｏｎy ｗas obtaiｎ