医学细胞生物学设计性实验报告实验项目一:动物细胞融合实验原理两个或两个以上的细胞在自发或诱导条件下合并成为一个双核或多核细胞的过程成为。在通常情况下,两个细胞接触并不会发生融合现象。因为各自存在完整的细胞膜,在特殊融合诱导物的作用下,两个细胞膜发生一定变化,就可以促进两个或多个细胞聚集,相接触的细胞膜之间融合, 继而细胞质融合,形成一个大的融合细胞,在自然界的就是细胞融合的过程。细胞融合受精目前,细胞融合的诱导物种类很多,常用的主要有灭活的仙台病毒, 聚乙二醇( PEG )和电脉冲。目前应用最广泛的是聚乙二醇,因为它易得, 简单,且融合效果稳定。实验用品(1). 材料:鸡血。(2). 试剂: Hanks 液,PEG 溶液(MV=400) ,1640 液(含 10% 灭活小牛血清和不含血清的两种), % 生理盐水, % 次甲基蓝染 (3). 仪器设备:显微镜(800r/min) ,离心机,水浴箱,酒精灯,吸管,载玻片、盖玻片,滤纸。混合液离心( 800 r/min 离心) 8ml hanks 液混匀实验步骤 8 min 静置 1min 后 37℃水浴 PEG 溶液热的 1640 液混匀 37 ℃水浴保温悬浮离心洗涤流尽剩余液体鸡血 10% 悬液融化冷却至 50 ℃ 90S 内加入 Hanks 液含小牛血清的 1640 液 % 次甲基蓝染染液染色镜检 37 ℃水浴 5min 离心弃上清 10min 吸纸吸干 37 ℃水浴孵育 30min 注意事项 1. 制备 50%PEG 一定要保温在 37℃水浴中,不然冷却后会有结晶析出。 2. 在离心管中加 PEG 之前,一定要将离心管倒置在滤纸上,流尽液体,否则残留液会改变 PEG 的浓度。 3. 融合过程观察:分别于温育 5min 、10min 、20min 、30min 取细胞悬液一滴制成临时装片。两个细胞核发生,形成一个含有两个或多个核的圆形细胞。预期结果融合
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