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流感病毒通过miR-29c抑制宿主抗病毒免疫应答的研究
Induction of the cellular miR-29c by influenza virus
inhibits the innate immune response




作者姓名：张晓阳
专业名称：预防兽医学
指导教师：段铭 副教授
学位类别：农学硕士
答辩日期：2015 年 6 月 2 日
本研究由国家自然科学基金（项目编号：31172337）
资助




The research was supported by the National Natural
Science Foundation of China（31172337）
中文摘要
流感病毒通过miR-29c抑制宿主抗病毒免疫应答的研究

A 型流感病毒（influenza A virus，IAV）是单股负链 RNA 病毒，其首先侵染
的是宿主的呼吸系统，临床表现从轻微的上呼吸道感染到严重的肺炎。
MicroRNA(miRNA)属于非编码 RNA 家族，在转录后水平调控靶基因表达。目前
在各种生物中已经确定了成千上万种 miRNA，其参与了细胞分化、增殖、凋亡
和病原感染等诸多生物学进程的调控。人的 miR-29 家族包括 miR-29a、miR-29b
及 miR-29c。最近的研究显示，miR-29 能够调节机体的天然免疫和适应性免疫，
但其在 IAV 感染过程中对于宿主免疫反应的作用机制尚不明确。
我们前期 miRNA 组学的结果表明，当机体感染 IAV 后，miR-29 家族的表达
显著上调，尤其是 miR-29c。围绕 miR-29c 我们进行了如下的研究。第一，首先
分析了先前的关于 IAV 不同时相感染 A549 细胞的 miRNA 表达谱数据，并应用
Real-time PCR 对表达差异显著的 miR-29c 进行了验证。预测得到了 miR-29c 的
潜在靶基因集合，并对此进行生物信息学数据挖掘，其中由于 A20 是一个重要
的机体炎症和抗病毒信号通路的调节蛋白，对于维持机体的免疫稳态具有重要作
用，据此筛选出 miR-29c/A20 互作对作为研究的切入点；第二，利用双荧光素酶
报告基因技术、Real-time PCR 以及 Western Blotting 实验对 miR-29c 与 A20 之间
的相互作用机制进行了确证，并证明 IAV 能够有效增加 A20 mRNA 的稳定性，
且通过过表达和表达抑制的系列实验证明 IAV 通过诱导 miR-29c 的表达促进了
细胞 A20 的表达；第三，在功能学实验部分，先利用荧光素酶报告基因和 Western
Blotting 技术证明 miR-29c/A20 能有效抑制 NF-κ B 信号通路的激活。我们通过
Real-time PCR方法对 miR-29c/A20互作对在IAV感染 A549细胞内TNF-α 、 IFN-
β 、 IL-1β 、 IL-6、以及 IL-8 等细胞因子的 mRNA 表达变化进行分析，证明
miR-29c 能通过上调 A20 的表达来抑制 IAV 诱导的 NF-κ B 下游抗病毒和促炎细
胞因子的表达。
综上所