实验八 病毒鸡胚接种与细培养.ppt

兽医微生物实验教学课件
（动物医学本科专业）
动物医学系
实验八 病毒鸡胚接种与培养
目的要求：
1、了解不同日龄鸡胚接种的途径和应用。2、掌握鸡新城疫病毒鸡胚尿囊腔接毒、收毒方法。
3、掌握鸡胚成纤维细胞培养和新城疫病毒接种、病变观察及收毒。实验内容：1、鸡胚的选择和接种途径：鸡胚发育正常时，可见清晰的血管和活的鸡胚，血管及其主要分支均明显，呈鲜红色，鸡胚可以活动。
卵黄囊接种：6-8日龄的鸡胚；
绒毛尿囊腔接种：9-13日龄的鸡胚；
鸡胚血管注射：12-13日龄鸡胚；
羊膜腔和脑内注射：10日龄鸡胚。
2、鸡新城疫病毒接种液或接种病料的处理；照蛋、打孔；接种。接种后的检查和收毒。
3、鸡胚成纤维细胞培养和新城疫病毒接种、病变观察及收毒。
病毒分离培养 
分离培养：动物接种——原动物/实验动物
鸡胚接种——尿囊腔、卵黄囊、尿囊膜、羊膜腔等
细胞培养——原代细胞 cpe观察空斑
二倍体细胞 基因克隆/扩增
传代细胞
组织块培养——肠管、气管环等
在无菌条件下采取9－10日龄鸡胚
↓
除去头(或仅除去喙和眼)、爪和内脏，并剪成块
↓
用Hanks液等充分冲洗
↓
剪将其剪成lmm大小的碎块
↓
加入Hanks液或其他洗液，充分冲洗
↓
％胰酶，－
↓
37℃水浴中感作30分钟，每10分钟轻轻摇动一次
↓
吸弃上层胰酶溶液
↓
用洗液轻洗2次后
↓
吸管充分吹打，直至形成均匀的细胞悬液
↓
准备细胞计数
↓
单层细胞培养
鸡胚成纤维细胞培养程序：
鸡胚成纤维细胞培养
细胞培养的特点：
每个细胞的生理特性基本一致；
感染病毒的细胞可通过细胞病变观察结果；
免疫学和核酸技术检测细胞内有无培养病毒；
从感染的组织分离病毒和病毒克隆。