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氨基酸蛋白质提取工艺特性
一、氨基酸特征
因氨基酸分子较小, 且有羧基、氨基, 同时含有碱性和酸性极性基团较多, 所以它极性较大, 能溶于水, 不溶于有机溶剂。因同时含有羧基和氨基, 有酸碱两性性质, 能与酸和碱形成不一样盐。当溶液pH发生改变时, 溶液中离子状态也发生了改变。在电场中酸性溶液氨基酸则向阴极电泳, 而在碱性溶液中则向阳极电泳, 当溶液pH值达一定时, 氨基酸不向任何电极移动, 此时溶液pH值就是该氨基酸等电点。不一样氨基酸有不相同电点, 在等电点时氨基酸溶解度最低, 依据这种性质能够用电泳法分离氨基酸。
氨基酸在合适条件下, 能进行有机胺或有机酸几乎全部反应。与通常酸和碱可生成稳定盐, 大部分均能溶于水, 但与重金属如铜、银、汞等制成络合物不溶于水, 也可利用这种性质来分离氨基酸。
二、氨基酸浸出
①水浸出法: 将中草药以粉碎机粉碎, 装入逆流浸出罐组每一个浸出罐中。用水做浸出溶剂, 最好在有搅拌条件下, 加热进行逆流浸出。
②稀乙醇浸出法: 将生药粉末装入逆流渗滤浸出罐组每一个浸出罐中。以70%乙醇进行渗滤浸出, 先浸出溶液浓度较大, 后浸出溶液浓度较低。最好采取逆流渗漉浸出法, 把出液系数控制在5, 能够得到很好浸出效果。
三、氨基酸分离
水浸出液或稀乙醇减压浓缩后水溶液往往含有多个或十多个氨基酸, 所以所得是总氨基酸, 必需进行分离纯化。通常采取以下纯化方法:
①离子交换法:这是分离氨基酸常见方法。可直接将水或稀乙醇提取物经过装有离子交换树脂交换柱, 带正荷氨基酸与树脂上-SO３基吸附。因为氨基酸带正电荷随溶液pH发生改变, 同一氨基酸在不一样pH缓冲溶液中, 以及不一样氨基酸在同一pH环境中, 所带正电荷各不相同, 与磺酸基吸附强弱也对应不一样。能够借助这种差异, 使氨基酸相互分离。
②成盐分离法:利用一些酸性氨基酸与一些金属化合物, 如氢氧化钡、氢氧化钙生成难溶性盐, 或某碱性氨基酸与通常酸生 成盐, 从而与其她未成盐氨基酸分离。如南瓜子中南瓜子氨基酸是经过与过氯酸生成结晶性盐而分出。
③晶析法:利用不一样氨基酸等电点不一样, 进行晶析结晶分离。比如在含有亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸溶液, ～, 浓缩先晶析出亮氨酸, 它母液加盐酸后再浓缩晶析出异亮氨酸, 最终母液中回收缬氨酸。
四、氨基酸、肽判别反应
①茚三酮(Ninhydrin)反应: 全部a-氨基酸及含有a-氨基酸肽类和蛋白质都能和该试剂反应展现兰色或兰紫色。必需时加热, 反应可在滤纸上进行。
(2)吲哚醌(Isatin）试剂反应: 不一样氨基酸与吲哚醌试剂反应, 能显示不一样颜色。因为试剂配制方法不一样, 对同一个氨基酸所显示颜色也往往有差异。吲哚醌不仅可用于氨基酸显色, 而且从其颜色区分, 能够帮助识别氨基酸。显色不稳是其特点, 氨对显色无干扰。
第二节 蛋白质提取工艺特征
一、不一样结构蛋白质及其溶解性质
蛋白质按其功效可分为活性蛋白和非活性蛋白二类;
按结构又可分为简单蛋白和结合蛋白二类:
再一个分类是依据蛋白质溶解度差异而分为水溶性蛋白、醇溶性蛋白等, 还有一类硬蛋白, 不溶于水、稀酸、稀碱和有机溶剂, 遇强酸、强碱水解。
蛋 白 质 类 别
溶 解 性 质
简单蛋白质








1、溶于水及稀盐、稀酸、稀碱溶液，可被50%饱和度硫酸铵析出。2、，但加入少量的盐、碱则可溶解。
，可为50%的饱和度硫酸铵析出。
3、溶于70—80%乙醇中，但不溶于水及无水乙醇。
4、在等电点不溶于水，也不溶于稀盐酸，易溶于稀酸，稀 碱溶液。
5、溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀。
6、溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀。
硬蛋白质
不溶于水、盐、稀酸、稀碱
结合蛋白质(包括磷蛋白、粘蛋白、糖蛋白、核蛋白、脂蛋白、血红蛋白、金属蛋白、黄素蛋白等)
此类蛋白质溶解度性质随蛋白质与非蛋白结合部分的不同而异， 除脂蛋白外，一般可溶于稀酸，稀碱及盐溶液中，脂蛋白如脂质部分露于外，则脂溶性占优势，如脂质部分被包围于分子之中，则水溶性占优势。
表6-1 不一样结构蛋白质及其溶解性质
二、蛋白质及酶通常提取方法
凡能溶于水、稀盐、稀酸或稀碱蛋白质或酶, 通常都可用稀盐溶液或缓冲溶液进行提取。稀盐溶液有利于稳定蛋白质结构和增加蛋白质溶解度。加入提取液量要合适, 加入量太少提取不完全, 加量太多, 则不利于浓缩, 通常见量为原