2021年大鼠P物质SPELISA试剂盒说明指导书.doc

大鼠P物质(SP)酶联免疫吸附测定试剂盒
使用阐明书
产品编号：QS41985
北京奇松生物科技有限公司
.com

本试剂盒仅供体外研究使用!
预期应用
ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其他有关生物液体中SP含量。
实验原理
用纯化抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗SP抗体微孔中依次加入标本或原则品、生物素化抗SP抗体、HRP标记亲和素，通过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶催化下转化成蓝色，并在酸作用下转化成最后黄色。颜色深浅和样品中SP呈正有关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒构成及试剂配制
酶联板：一块（96孔）
原则品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后重复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为500pg/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，，，，，样品稀释液直接作为原则浓度0pg/ml，临用前15分钟内配制。如配制250pg/ml原则品：()500pg/，混匀即可，别的浓度以此类推。
样品稀释液：1×20ml。
检测稀释液A：1×10ml。
检测稀释液B：1×10ml。
检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前依照预先计算好每次实验所需总量配制（100μl/孔），-。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释办法同检测溶液A。
底物溶液：1×10ml/瓶。
浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
终结液：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。
覆膜：5张
使用阐明书：1份
自备物品
（建议参照仪器使用阐明提前预热）
，EP管
，全新滤纸
标本采集及保存
血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免重复冻融。
血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免重复冻融。
其他生物标本：请1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免重复冻融。
注：以上标本置4℃保存应不大于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响最后检测成果，因而溶血标本不适当进行此项检测。
操作环节
实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后样品符合试剂盒检测范畴，计算时再乘以相应稀释倍数。
加样：分别设空白孔、原则孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加原则品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反映120分钟。为保证明验成果有效性，每次实验请使用新原则品溶液。
弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜，37℃反映60分钟。
温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大概400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反映60分钟。
温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见原则品前3-4孔有明显梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终结）。
依序每孔加终结溶液50μl，终结反映，此时蓝色立转黄色。终结液加入顺序应尽量与底物液加入顺序相似。为了保证明验成果精确性，底物反映时间到后应