浙江农林大学食品专业模块实验课程实验指导书适用班级:( 食品 09) 农业与食品科学学院 2011 年 11月 18日实验一糕点类食品中菌落总数的检测一、实验目的通过检测糕点类食品中菌落总数,熟悉新产品开发及其食品检验中菌落总数的检验。二、实验器具及试剂 1. 设备和材料微生物实验室常规灭菌及培养设备:恒温培养箱( 36℃, 30℃)、冰箱( 2℃5℃)、恒温水浴箱( 46℃);天平:感量 、均质器、振荡器、无菌吸管: 1ml (具 刻度)、 10ml (具 刻度)或微量移液器及吸头、无菌锥形瓶:容量 250ml 、 500ml 、无菌培养皿:直径 90mm 、 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸、放大镜或(和)菌落计数器或 pertrifilm TM1 ) 自动判读仪。糕点类食品若干。 2. 培养基和试剂平板计数琼脂培养基; 无菌生理盐水:称取 氯化钠溶于 1000ml 蒸馏水中, 121 ℃高压灭菌 15min 。三、实验内容(一) 平板菌落计数法菌落总数的检验程序见图一: 检样: 25g (或 25ml )样品+225ml 稀释液,均质 10 倍系列稀释选择 2个~3 个十一样品均夜,各取 1ml 分别加入无菌培养皿内每皿中加入 15ml~20ml 平板计数琼脂培养基,混匀培养( 36℃、48h ) 计算各平板菌落数计算菌落总数报告图一菌落总数的检验程序 操作步骤: 样品的稀释:固体和半固体样品:称取 25g 样品置盛有 225ml 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内, 8000r/min 1000r/min 均质 1min 2min ,或放入盛有 225ml 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1min 2min ,支撑 1:10 的样品均液。 液体样品: 以无菌习惯吸取 25ml 样品置盛有 225ml 磷酸盐缓冲或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成 1:10 的样品均液。 用 1ml 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品均液 1ml , 沿管壁缓慢注于盛有 9ml 稀释液的无菌试管中( 注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面), 振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成 1:100 的样品均液。 按 操作程序,制备 10 倍系列稀释样品均液,每递增稀释一次,换用 1次 1ml 无菌吸管或吸头。 根据对样品污染状况的估计,选择 2个3 个适宜稀释度的样品均液(液体样品可包括原野),在进行 10 倍递增稀释时,吸取 1ml 样品均液于无菌平皿内,每个稀释度做 2个平皿。同时,分别吸取 1ml 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 及时将 15ml 20ml 冷却至 46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于 46℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。 培养 琼脂凝固后,将平板翻转, 36℃培养 48h ,水产品 30℃培养 72h 。 如果样品中可能含有在轻质培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄琼脂培养基(约 4ml ),凝固后翻转平板,按 条件进行培养。 菌落计数可用肉眼观
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