吞噬细胞吞噬功能的检测.doc

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吞噬细胞吞噬功能的检测
一、小吞噬细胞的吞噬作用
(一) 体内法
[材料]
(1) 动物: 豚鼠。
(2) 菌种: 金黄色葡萄球菌菌液。
(3) 无菌注射器及针头、无菌肉汤、玻片、瑞氏染液。
[方法]
(1) 第1天注射无菌肉汤10 ml 于豚鼠腹腔，隔24 h 同法注射肉汤5 ml。20 min 后，再注射金黄色葡萄球菌菌液Iml 于上述部位。
(2) 注射完毕，每隔20 min 用注射器抽取腹腔液，并做推片，待其自千后，用瑞氏染色法染色，镜检时见金黄色葡萄球菌被小吞噬细胞吞入胞浆时为宜。
(3) 瑞氏染色方法如下: 将瑞氏染液滴加数滴于涂片上。加入等量的蒸馏水，轻轻混匀，染5 -10 min。用蒸馏水(或自来水) 冲洗。待干或轻轻用吸水纸将涂片吸干，油镜检查。
[结果]
染色后，可见小吞噬细胞的核及被吞噬的细菌呈深紫蓝色，而小吞噬细胞的胞浆为紫色。
(二) 体外法
[目的]
。
。
、油浸镜的使用与保护方法。
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[原理]
中性粒细胞具有在噬杀菌功能，当与颗粒物质(如金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌等)混合后，孵育一定时间，颗粒物质被中性粒细胞吞噬。根据吞噬率和吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能，但不能反映其杀伤功能。
[材料]
(1) % 枸橼酸钠。
(2) 碘伏、无菌注射器及针头、吸管、试管、载玻片、温箱等。
(3)瑞氏染液
(4) 葡萄球菌悬液: 取白色葡萄球菌在琼脂斜面上生长24 h的培养物，用无菌生理盐水刮洗下菌苔，用PBS洗涤2次，最后用比浊法将菌液调整至5 x10 7ml 悬液，100℃加热15min，置4℃冰箱备用。
[方法]
(1) m,% ml的小试管中，混匀，防止凝血(或由一人抽血10 ml 抗凝，供全小班使用)。
(2) ml,加于上述血液中混匀。
(3) 37 C温箱孵育30min,每10 min取出振摇1次，再继续静置孵育，于30 min 时取出。
(4) 用毛细管从白细胞层(即沉淀红细胞的表层) 吸取白细胞1滴，滴在载玻片上，推成薄片，自然干燥。注意: 推制厚薄适宜的血膜片，血膜应呈舌状，头、体、尾清晰可分; 推制好的血膜应在空气中晃动，以促进快干; 天气寒冷或潮湿时，应于37 C温箱中保温促干，以免细胞变形缩小。
(5) 瑞氏染液染色可用30 s快速单一染色法: 将染液铺满血膜，30 s以后用自来水冲洗。切勿先将染液倾去再冲洗，以免染液中的细小颗粒附着于玻片上使标本观察不清晰。
(6) 干燥后油镜检查，寻找白细胞，计数。
[注意]
应选择涂片的体尾交界处染色良好的区域进行计数，由血膜边缘向中央依次上、
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下呈曲线运动，以免重复计数(图2-2)。
[结果]
染色正