细胞培养实验报告【精选文档】.doc

细胞培养实验报告【精选文档】
细胞培养实验报告【精选文档】
发奋识遍天下字 ，立志读尽人间书。
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细胞培养实验报告【精选文档】
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动物细胞培养
一、试验目的。
1、掌握无菌操作技术。
2、掌握原代和传代细胞培养。
3、掌握细胞冷冻和复苏技术。
4、了解培养成纤维细胞的形态.
二、试验原理。
将动物机体的组织从机体中取出，经各种酶(常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理,分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
对具有移动特性的稳定细胞系或细胞株进行长期保存,一方面可以作为细胞研究的试验材料,另一方面可以做细胞制品的生产材料。目前广泛应用的细胞保存方法是低温冷冻保存法，。细胞的冷冻保存的原则是慢冻快融，这样做是为了防止细胞由于冷冻过程中产生了冰晶而发生细胞破裂。
三、实验器材及药品.
器材:怀孕的小白鼠、培养箱、培养瓶、培养皿、移液器、眼科剪、镊子、酒精灯、离心机、水浴锅、倒置显微镜、CO2培养箱、超净工作台、离心管、高压灭菌锅、试管架等。
药品:小牛血清、DMEM合成培养基、抗生素、DMSO冷冻剂、胰酶、PBS缓冲液等。
四、实验操作。
1、消毒灭菌.
将实验所需用到的工具(如枪头、培养皿、眼科剪、镊子以及每个人的实验服等)集中灭菌、％的酒精以备实验时所需。
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2、培养基的配制.
分别取10ml的小牛血清、90ml的DMEM合成培养基，将两种培养基混合在一起，再向其中加入1ml的抗生素,吹打混匀就得到了细胞培养的培养液。
3、原代培养.
（1）、。实验开始前带好乳胶手套，用酒精对手进行消毒。将怀孕的小白鼠放在酒精中杀死,取出子宫内的胚胎组织。
（2）、剪切与消化。将胚胎组织放于平板中，用眼科剪将组织块剪碎，剪得越碎越好。将剪碎的组织块放于离心管中，加入大约200µl的胰酶进行消化。也可将其置于37度恒温箱中进行消化.
（3)、分离细胞。消化到一定时间时，如果离心管中的溶液中出现了明显的浑浊，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，则应该加入与胰酶等量的培养液终止消化。离心管于离心机中离心，弃上清液，得到分散的细胞。
(4）、,吹打混匀，将培养液用移液器移到细胞培养瓶中。℃恒温CO2箱培养，瓶口少少拧的松一点。
4、传代培养.
（1）、倒置显微镜下观察细胞的形态。倒置显微镜下观察培养细胞的长势及密度，根据细胞