棉花耐盐基因ghnhx1启动子的克隆及功能分析.pdf

英文缩写符号及其中英文对照表二氯苯氧乙酸英文缩写英文名称中文名称脱落酸苄基腺嘌呤氨苄青霉素亚甲基丙烯酰胺牛血清蛋白花椰菜花椰病毒头孢曲松钠羧苄青霉素利福平重蒸水焦碳酸二乙酯脱氧核糖核酸脱氧核糖核苷三磷酸二硫苏糖醇溴化乙锭乙二胺四乙酸黄咸侨┧崦丙烯酰胺琋’
信使心峨膃·英文缩写英文名称中文名称胭脂碱合成酶Ⅵ培养基谆⌒⌒瓮苷酸西—甅
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棉花耐盐基因启动子的克隆及功能分析摘要液泡型跄嫦蛟俗L墙昀捶掷氲降脑谥参锬脱涡院系:生命科学学院指导教师:郑成超教授目前在植物基因工程中广泛应用启动子是组成型启动子,例如ㄒ嘶ㄒ恫《舳印W槌尚推舳硬荒艽邮奔浜涂占上有效的调控目的基因的表达。不加控制的、大量表达外源基因可能会对转基因植物造成毒害,也会在能源利用上造成浪费。所以对于诱导型、组织特异型的启动子的研究和利用就显的尤为重要。盐胁迫是影响植物产量的重要因素之一,目前关于盐诱导启动子的功能分析很少。中起着重要作用的一类功能蛋白。液泡型疕嫦蛟俗L宓鞍滋謇媒液泡基质中质子顺电化学梯度运出液泡,同时将胞质中的媾ǘ忍荻运入液泡内积累,这不仅能够降低胞质内的晕职收5腒疦比值,还可以有效利用储存在液泡中的魑I傅鹘诩痢我们从棉花中克隆的液泡型疕嫦蛟俗L寤騁,能够提高转基因烟草和水稻的耐盐性。以此为基础,本研究利用方法克隆了的启动子,并通过椒ɑ竦靡幌盗’端缺失片断,将启动子及巳笔嫌氡ǜ婊騁融合,转化烟草悬浮细胞,利用处理转基因细胞,发现该启动子能响应盐胁迫的诱导。同时发现一段响应胁迫信号诱导较强的区域。主要研究结果如下:軬’非编码区设计特异引物,利用的方法,从棉花基因组中克隆了长度为的稀8肈片断有个碱基和基因潜嗦肭氐衔0珿钠舳印;因银行注册号。利用蚉两个启动子顺式元件分硕士研究生:杨国栋山东农业大学硕士学位论文
狈⑾至搜斡盏荚<礼怂从元件析网站分析启动子,发现位于转录起始位点上游,/嬖谝桓别位点克隆到的该暇哂械湫推舳拥囊话闾卣鳎⑶铱赡苡敫髦中财獹舳./构建到植物双元表达载/誯载体,替换掉舳樱氡ǜ婊騁融合,通过农杆菌介导的转化方法转化烟草悬浮细胞。同时,利用姆椒ǘ訥舳’端缺失,将巳笔贤菇ǖ絧靥澹化烟草悬浮细胞。将所有的转化体通过测定钚岳幢硎酒舳拥幕性。钚圆舛ń峁砻鱃舳邮且桓鲅斡盏嫉钠舳樱煊盐胁迫信号最强的是区域,最强诱导比值达盏己蟮谋泶锪超过了谋泶锪俊瓽舳樱区段连接在载体启动予罨酒舳,与报告基因诤稀活性测定结果表明,该区段能够响应盐胁迫的诱导,诱导比值獹舳樱区段标记放射性同位素牒说鞍结合,进行凝胶迁移滞留试验,即进行聚丙稀酰胺凝胶电泳,电泳结束后放射自显影。结果表明,,/文芄缓秃说鞍滋匾旖岷希迸一步说明该慰赡芷溆凶B稼芸氐墓δ堋瓽舳樱/喂菇ǖ絧靥澹婊启动子,与报告基因诤希;滩萦耍嘌擅纾缓蠼蠫染色,分析懒钠舳拥淖橹泶锬J健=峁砻鳎闷舳釉谧;蜓滩幼苗的所有组织都有表达,没有明显的组织特异性。关键词:诱导型启动子盐诱导盐胁迫启动子笔Х治鲎;蛐∠赴转基因烟草和一些冷、于旱胁迫诱导有关的顺式作用元件,如识别位点。预测的结果表明诱导有关。杨冒栋:棉花耐盐基因启动予的克隆及功能分析
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,生物体的各种生命表现都是基因有序表达的结果。基因在时间、空间上有序的表达离不开基因准确的表达调控。根据基因调控在同一事件中发生的先后次序,可将其分为转录水平调控、转录后水平调控、翻译水平调控及蛋白质加工水平的调控等。其中,基因在转录水平的调控是非常重要的,也是当前分子生物学研究的热点问题。它主要涉及酆厦浮⑺呈降骺卦<头词阶饔靡蜃尤忠蛩氐南