解读esi电喷雾质谱.doc

解读 ESI 电喷雾质谱第三页电喷雾的产生电喷雾当在液体流上加上高电压,会产生液滴,这种技术被称为电喷雾。例如: HPLC 流出的就是液体流。在20 世纪早期这种产生液滴的方法有各种各样的应用。在电喷雾中,较大的液滴不断爆裂成更小的液滴,最后, 被分析物解离为离子进入气态。在这里,纯粹的电喷雾指不使用雾化气。在更高的 LC 流速下,使用鞘气在帮助完成雾化过程。一些研究者称这种方法为“气动辅助的电喷雾”( pneumatically assisted electrospray )。举例在这个例子中,一个单肽离子化产生一个带电部分和一个不带电部分。分子中正电荷的数量常和分子中碱基位点的数目是相关的。在质谱的正离子采集模式下,分析物在低 pH 下喷出,更容易形成正离子。在质谱的负离子采集模式下,在分子等电点以上的负离子化有利于产生去质子的分子。 ESI 质谱的基本原则是:在质谱本身能用其电场影响分子之前,分子必须能够带电。下面的部分我们会介绍质谱中为什么会出现分子群。注:大部分从胰蛋白酶酶解产生的肽,会有两个潜在的质子化的位点:氨基和碱性的 C端残基,赖氨酸或精氨酸。液质联用流动相的选择 1 )甲醇 vs 乙腈甲醇: 优点:便宜、相同的保留因子所需要的甲醇的比例大,有机相浓度大有利于离子化。缺点:反压高,洗脱能力差。乙腈: 优点:洗脱能力强(色谱峰窄),反压低。缺点:价格较高。 2 )有机相的比例: 一般有机相比例太低,不利于雾化,太高不利于离子化(且背景较高)。推荐使用 40 %左右的有机相比例。 3 )梯度 vs 等梯度梯度洗脱有利于未知样品的测试,但所需要的时间较长,且信号稳定性较差。等梯度洗脱,常用于 2-3 个保留时间较近的化合物的测试,所需时间短( 2-3min) , 且信号稳定。流动相过滤预防:所有的流动相(水相,有机相,盐溶液等),必须用 的滤膜过滤;仪器不使用时,需将溶剂滤头从水相或缓冲液相中取出,并浸泡在有机溶剂中, 否则会导致霉菌和微生物的生长, 造成溶剂滤头堵塞。吸滤头材质:不锈钢烧结,陶瓷,玻璃,聚四氟等故障:堵塞,流路不畅(水相滤头容易产生) 表现:管路中不断有气泡生成,而且容易造成流量不准,严重的话压力波动原因:水中细菌、流动相中颗粒、空气中灰尘等措施:用5%稀硝酸,超声波清洗,再用蒸馏水清洗,最好一个月洗一次(玻璃材质的不能超声) 对不能用在做 LC-MS 的流动相系统中加甲酸钠或醋酸钠。因为无论你使用 ESI 还是 APCI 源, 这样的盐类都不能挥发, 结果很可能是堵住离子源后方的加热毛细管,这时问题就很严重了。我不大清 AB , Agilent 的公司的质谱仪对于不挥发性的盐的耐受能力如何, 但是就我们实验室的几台 Finnigan 公司的质谱仪情况来看, 无论是离子阱质谱仪还是三重四极杆的质谱仪, 都不能在流动相系统中加入不挥发性的盐类。如果实在是必须在流动相中加缓冲盐以调节峰形,我使用的唯一的缓冲盐就是可以挥发的醋酸铵,而且浓度也严格控制在 10 mM 以下。即便这样,晚上作完实验打开仪器的离子源也还是发现在离子源里有层白色的膜。总之,对于 LC-MS ,能不用盐就尽量不要用缓冲盐了。若做的药物对于正离子响应好,一般采用甲醇-水- 甲酸系统或乙腈-水- 甲酸系统就完全可以搞定;若做的药物对于负离子响应