构建去细胞牛颈静脉内皮化实验的研究.pdf

构建去细胞牛颈静脉内皮化实验的研究.pdf原创性声明本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名: 日期:#年』月;日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文, 允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》, 并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名燧窃珥嗍年年』畦日———] (Collagen,ColIV),明胶为单独预衬成分,纤维连接蛋白+明胶,纤维连接蛋白+Ⅳ型胶原+明胶为混合预衬成分,设置磷酸缓冲液体组(PBS)预衬为对照组,每组成分均以30 p1的剂量采用物理包裹法, 预衬去细胞牛颈静脉血管片54片()。每片种植人脐静脉内皮细胞株细胞(CRL-2480)5×105,静态培养7天, 取1,4,7天标本消化血管片表面细胞记数,标本切片HE染色,扫描电镜和透射电镜检测,比较各处理组血管片表面细胞黏附数目,结合程度,对比不同预处理方法对增强细胞黏附性和促进生长情况的影响,探索最佳组织工程血管改性技术。结果:(1)细胞记数:细胞培养第1天,预衬组细胞数目多于对照组(p<),预衬处理组间无明显差别。第4—7天,混合预衬组与单一预衬组问有差别(p<),混合预衬组内无差别(p>)。(2)标本石蜡包埋后切片HE染色结果:第l天各组血管片表面细胞排列密集,紊乱,细胞核有堆积,部分呈双层排布;第4天,对照组血管表面细胞疏松,有成片分布;预衬组细胞连接成片,呈单层排布。第 7天,对照组和单独预衬组细胞都较少,混合预衬组细胞铺连成片, 博士学位论文中文摘要与下方纤维结构有连接,未出现表皮脱落。(3)取7天标本扫描电镜显示:PBS组血管片表面细胞稀疏,细胞间无桥接,与下方的纤维结构联结不明显。混合预衬组铺连成片,细胞间长梭形有桥接和突起,与去细胞的血管片纤维之间形成连接。(4)透射电镜:可观察到表面生· 长内皮细胞与下方纤维成分有空白带存在。结论:去细胞加光氧化处理后的牛颈静脉血管片可生长内皮细胞。经过Fn,Col IV,明胶单独预衬处理的血管片表面,可增强内皮细胞黏附和贴壁生长。混合预衬比单独预衬处理在增强细胞黏附性及贴壁生长方面效果更好。关键词牛颈静脉带瓣管道预衬内皮化细胞外基质博士学位论文中文摘要第二章去细胞牛颈静脉体外种植骨髓分化后内皮细胞研究目的:从犬骨髓细胞中分离出骨髓间充质干细胞,提取内皮祖细胞,体外培养分化为内皮细胞,种植到混合预衬去细胞牛颈静脉材料上培养,体外构建组织工程血管。方法:,通过密度梯度离心法从犬骨髓细胞中分离出单个核细胞,骨髓单个核细胞通过反复贴壁培养法获得内皮祖细胞,CD34抗原染色鉴定;含多种细胞生长因子的内皮细胞培养基培养,促进内皮祖细胞分化为成熟的内皮细胞,CD31和人类Ⅷ因子相关抗原染色鉴定。 ,将内皮细胞种植到血管材料,体外静态培养7天后,HE染色观察表明细胞覆盖情况及扫描电镜检测血管片上细胞的生长情况。结果:原代培养的骨髓间充质干细胞呈螺旋状、放射状生长排列。原代培养的骨髓内皮祖细胞很快形成克隆,第2代细胞中CD34相关抗原的表达阳性率约45%,CD31和Ⅷ因子表现阴性。从第4代细胞起表现出内皮细胞样形态,呈“铺路石"状,并表现接触抑制的特点, 第5代细胞CD34相关抗原表达阴性,CD3l和Ⅷ因子相关抗原表达的阳性率为78%左右。种植于组织血管表面细胞,HE染色显示细胞覆盖血管表面,扫描电镜检测到血管片上均有较致密的细胞覆盖生博士学位论文中文摘要长,但细胞排列无序。结论:骨髓来源的间充质干细胞分化为内皮细胞,可种植于脱细胞牛颈静脉血管,构建内皮化组织工程血管。关键词:骨髓间充质干细胞,内皮祖细胞,预内皮化,组织工程血管 IV ●博士学位论文中文摘要第三章内皮化去细胞牛颈静脉重建犬右室流出道组织学观察目的:将种植内皮细胞的组织工程血管,用于重建犬右心室流出道实验模型,观察体内组织工程血管与血液接触的条件下的表面内皮化、细胞浸润以及钙化、血栓情况,评价内皮化去细胞牛颈静脉临床应用可行性。方法:以种植分化扩增所获内皮细胞的去细胞牛颈静脉带瓣管道为研究对象,建立犬重建右心室一肺动脉连接的动物模型,设立未种植细胞的去细胞结合光氧化制备的牛颈静脉血管