培养基母液的制备.doc

目录实验一培养基母液的制备………………………………………………… 1 实验二培养基的配制与灭菌……………………………………………… 6 实验三无菌操作及种子无菌播种………………………………………… 9 实验四激素对器官分化及愈伤组织诱导的影响………………………… 13 实验五茎尖培养与脱毒…………………………………………………… 16 实验六有丝分裂制片技术和显微观察…………………………………… 18 实验七植物多倍体细胞的诱发与鉴定…………………………………… 22 实验八植物组织总 DNA 的提取与测定…………………………………… 24 实验九毛状根培养………………………………………………………… 27 附录……………………………………………………………………… 32 实验一培养基母液的制备一、实验目的学习和掌握培养基母液的配制方法和注意事项。二、实验原理培养基的主要成分包括无机营养物质、碳源、有机物质、植物生长物质等,由于每种培养基往往含有一二十种化合物,配制起来不仅繁琐,而且还很难达到准确和精确,尤其是生长调节物质和微量元素用量较少,难于准确称量,稍有偏差,就会影响试验结果及试验的重复性。为解决这一问题,常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配制培养基时,只需要按预先计算好的量吸取母液即可。三、实验药品和试剂 NH 4 NO 3、 KNO 3、 MgSO 4·7H 2O、( NH 4) 2 SO 4、 NaH 2 PO 4·H 2O、 CaCl 2·2H 2O、 MgSO 4·7H 2O、 KH 2 PO 4、 Na 2 -EDTA ·2H 2O、 FeSO 4·7H 2O、精选内容 MnSO 4·4H 2O、 ZnSO 4·7H 2O、 H 3 BO 3、 KI、 Na 2 MoO 4·2H 2O、 CuSO 4·5H 2O、 CoCl 2·6H 2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(VB 6)、盐酸硫胺素( VB 1)、甘氨酸、蔗糖、琼脂四、实验仪器及用具电子天平(感量为 )、扭力天平(感量为 )、烧杯( 1000ml 、 500ml 、 100ml 、 50ml )、量筒( 500ml 、 25ml )、容量瓶( 1000ml 、 500ml 、 100ml )、试剂瓶( 1000ml 、 5 00ml 、 100ml )、药勺、玻棒、电炉、石棉网。五、实验方法与步骤按组分别配制 MS、B 5培养基母液,下面以 MS培养基母液配制为例进行介绍。 1、大量元素母液的配制(母液 1) 各成分按照表 1 培养基浓度含量扩大 10 倍,扭力天平称取,用蒸馏水分别溶解,按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到 1000ml 的容量瓶中, 即为 10倍的大量元素母液。倒入试剂瓶,贴好标签,注明每配 1L 培养基需取此液 100ml 。保存于冰箱中。表1 MS 培养基大量元素母液制备(母液 1) 序号药品名称培养基浓度( mg/L )扩大10 倍称量(mg) 1 NH 4 NO 3 1650 16500 蒸馏水定容至 1000ml 2 KNO 3 1900 19000 3 CaCl 2· 2H 2O 440 4400 4 MgSO 4· 7H 2O 370 3700 5 KH 2 PO 4 170 1700 注意: 配制大量元素母液时,某些无机成分如 Ca 2+、 SO 4 2 一、 Mg 2 十和H 2 PO 4 一等在一起可能发生化学反应,产生沉淀物。为避免此现象发生,药品采用等级较高的分析纯,各种化学药品必须先以少量蒸馏水使其充分溶解后才能混合,混合时应注意先后顺序。特别应将 Ca 2+、 SO 4 2 一、 Mg 2 十和H 2 PO 4 一等离子错开混合, 速度宜慢, 边搅拌边混合。 2、微量元素母液的配制(母液 2、3) MS 培养基的微量元素无机盐由 7种化合物(除铁)组成。微量元素用量较少,特别是 CuSO 4·5H 2O、 CoCl 2·6H 2O ,因此在配制中分母液 2、3 配制。按照表 2 ,表 3 配方,用感量为 的电光分析天平称量,其它同大量元素。配制培养基时,每配制 1L 培养基,取母液 2为 10ml ,母液3为5 ml 。表2 MS 培养基微量Ⅰ的配制(母液 2) 序号化合物名称培养基浓度( mg/L ) 扩大 50 倍称量(mg) 1 MnSO 4· 4H 2O 1115 蒸馏水定容至 5 00ml 2 ZnSO 4· 7H 2O 430 3H 3 BO 3 310 4 KI 5 Na 2 MoO 4· 2H 2O 0. 表3 MS 培养基微量Ⅱ的配