实验五 dmem培养液的配制.ppt

实验五 DMEM培养液的配制
【能力目标】
熟练掌握DMEM细胞培养液的配制。
500mL大烧杯 玻璃棒 250mL/500mL盐水
瓶 酸度计 50mL小烧杯3个
微孔滤膜 一实验五 DMEM培养液的配制
【能力目标】
熟练掌握DMEM细胞培养液的配制。
500mL大烧杯 玻璃棒 250mL/500mL盐水
瓶 酸度计 50mL小烧杯3个
微孔滤膜 一次性滤器 一次性滤纸 去离
子水 灭活的小牛血清 DMEM干粉 青霉
素 链霉素 NaHCO3 超净工作台 磁力搅
拌器 电子天平 药匙
【实验材料】
DMEM干粉 1瓶(1,000mL量)
NaHCO3
L-谷氨酰胺
超纯水 1,000mL
【配方】
取清洗干净的500mL大烧杯一个，加入
新鲜制备的三蒸水约300mL，加热至15~
30℃；
将DMEM干粉袋竖立轻弹，使袋中粉下
沉，剪开袋口，将干粉倒入500mL的大烧
杯中，用超纯水冲洗袋2~3次；
放入清洗干净的磁子，在磁力搅拌器充
分搅拌，以确保培养基干粉充分溶解；
【配制方法】
根据配方要求，加入准确称取的NaHCO3
，L-，充分摇匀至完全
溶解；
加入已经制备好的双抗溶液，使青霉素
和链霉素的最终使用浓度达到100μg/mL；
加入培养基总体积约10％的已灭活的小
牛血清；
【配制方法】
％的NaHCO3溶液调整溶液
~，加超纯水定容，并将
培养液转入盐水瓶；
用一次性滤器过滤上述培养液到灭菌的
盐水瓶，封口，4℃保存备用。
【配制方法】
实验五 1M HCl的配制
1M NaOH的配制
250mL烧杯 玻璃棒 250mL盐水瓶 一次
性滤纸 去离子水 电子天平 药匙 5mL
移液器 5mL吸头 NaOH 浓HCl
【实验材料】
用5mL的移液器准确移取盐酸21mL，
加入到279mL超纯水中。
【HCl的配制过程】
【NaOH的配制过程】
NaOH 10g
超纯水 250mL
边加边搅拌，溶解过程会产热。
【课程安排】
1、每组确定本组的D-Hank’s液是否有？
是否已过滤除菌；
2、每组的EDTA需要高压灭菌；
3、需要配制新鲜的1M HCl和1M NaOH
溶液，％的NaHCO3溶液；
4、需要重新灭菌5mL枪头；
5、每组准备一铝饭盒，内放小剪刀一把，
小镊子一把，手术钳一把，大剪刀一把，
高压灭菌；
【课程安排】
6、每组准备培养皿两套，干烤灭菌；
7、需要重新配制双抗溶液。