NBT法测定SOD活力.doc

NBT法测定SOD活力.doc(完好word版)NBT法测定SOD活力
(完好word版)NBT法测定SOD活力
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NBT 法测定 SOD 活力
原理
超氧化物岐化酶(完好word版)NBT法测定SOD活力
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NBT 法测定 SOD 活力
原理
超氧化物岐化酶（ superoxide dismutase，SOD）广泛存在于动、植物体内，是一种消除超氧阴离子自由基（ O2.-）的酶，它催化以下反响：
2 O2.- + 2H+ → H2O2 + O2
反响产物 H2O2 可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。
实验中依照超氧化物歧化酶克制氮蓝四唑 （ NBT ）在光下的复原作用来确立
酶活性大小。 在有氧化物质存在下， 核黄素可被光复原， 被复原的核黄素在有氧
条件下极易再氧化而产生
.-
.-
O2
， O2 可将氮蓝四唑复原为蓝色的甲腙，后者在
560nm 处有最大汲取。而
SOD 可消除 O2
.-，进而克制了甲腙的形成。于是光还
原反响后，反响液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可计算出
酶活性大小。
试剂
50mM， 磷酸缓冲液（ A + B 定容至 250mL）
130mM 甲硫氨酸， → 10mL，磷酸缓冲液配制
750μM NBT ， → 10mL，磷酸缓冲液配制
100μM EDTA-Na 2， → 100mL，磷酸缓冲液配制
20μM 核黄素， → 100mL，蒸馏水配制，避光保留附录：不一样 pH 磷酸缓冲液的配制
母液：
A： Na2HPO4 溶液： 用蒸馏水溶至 1L
B： NaH 2PO4 溶液：
用蒸馏水溶至 500mL
100mM 磷酸缓冲液配法： x(mL)A + y(mL)B 稀释至 200 mL
pH











x(mL)A











y(mL)B











实验步骤（ 1）酶液粗提
称取必定量的实验资料于预冷的研钵中， 加入适当磷酸缓冲液， 冰浴充足研磨后定容（ 1mL/）。取 匀浆于 4℃ ,10000rpm 离心 15min，上清液即为酶粗提液。（ POD，CAT，MDA ，可溶性蛋白等的测定均按此方法提取）
2）反响液配制
取透明度好的指