非诺贝特对大鼠主动脉MMP-9及PPARα表达影响.doc

非诺贝特对大鼠主动脉MMP-9及PPARα表达影响..doc非诺贝特对大鼠主动脉 MMP-9及PPAa表达影响
作者：祝庆，康维强，王熙宁 1 青岛市海慈医院心内科，山东 青岛 266033; 2 青岛市市立医院 ; 3 山东省立医院肾内科
【关键词】 明胶酶 B
[摘要]目的 观察饱和脂liferators; arteriosclerosis; Fenofibrate
在目前冠心病的基础与临床研究中，高脂血症等危险因素与冠状动脉内粥 样斑块形成的相互关系已经得到广泛证实和认同。大量研究结果显示， IL 、hs-
CRP MMP-欝炎性因子及Apo基因多态性表达在动脉粥样硬化（AS）过程中起到 了重要的作用，并与高脂血症等危险因素有着某种相关性。基于此，在众多的 血液和组织因子中，寻找一个与动脉粥 样硬化斑块及其危险因素均具有较高敏 感性和特异性的相关因子，成为目前冠心病研究工作中的新热点。本项实验研 究即以此为出发点，探讨在高脂饮食诱发动脉粥样斑块的过程中，非诺贝特对 MMP-9及 PPAR表达的影响，以及 MMP-Sf动脉粥样斑块形成可能的相关性。
材料与方法
实验动物
雄性Wistar大鼠30只，体质量180〜200 g，由山东省卫生防疫站提供。 大鼠由专人单笼饲养，明 暗周期为 12 h ，自由饮水，房间温度保持在 （25 ± 1） C,湿度在50流右。适应性饲养1周，随机将大鼠分为对照组、高脂 组（HF组）和高脂加非诺贝特组（HF+FF组），每组10只。
药品和试剂
大鼠饲料购自山东华康饲料公司。PPAR激活剂非诺贝特购自山东医药公 司。RT-PCR式剂盒购自大连宝生物技术有限公司；组织蛋白裂解液、MMP-9和 PPARa 一抗及相应二抗均购自Santa-Cruz公司；蛋白测定试剂盒购自Bio-Rad 公司；B -actin 一抗购自Ambion公司。
饲养方法
对照组大鼠食用标准饲料 ；HF 组给予高脂饮食，脂肪热量占 59%，以饱和脂 肪酸为主;HF+FF组在HF组基础上加用非诺贝特（20 mg?kg-1?d-1）。各组大鼠 每日膳食热量控制在每只 310 kJ ，每天 9:00 定时灌胃，喂养 5 个月。然后抽 血处死大鼠，取主动脉冻存。
RT-PCR
采用Trizol法抽提大鼠主动脉总RNA RT- PCR反应依据TaKaRa- RNAPCRki说明进行。PCR反应扩增MMP-9和PPAR所用引物如下。
20卩L逆转录体系中加入RNA 1卩g。紫外线分光光度仪（DU640）测定 RNA
量和纯度。其中GAPD为内参照。RT-PCR反应体系50卩L,扩增产物经
15 g/L 琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，凝胶影像分析仪 (Al- phaimager 2200) 测定各条带的吸光度值，计算各目 的条带与内参照的比值。
血脂的测定
血三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C)和总胆固醇(TC)含量分别采用GPO-PA乙酰丙酮法和CHO-PA法测定。
Western blot
液氮冻存的主动脉剪碎，加入预冷的 TBS洗涤2次，按1 : 10比例加入预 冷的裂解液，超声仪裂解组织10 s , 4 C静置30 min使其充分裂解;4 C下12 000 r/ min离心10 min，取上清，改良Lowry法测定胞