碱性成纤维细胞生长因子基因诱导表皮细胞去分化的实验研究.pdf

内蒙古医学院
硕士学位论文
碱性成纤维细胞生长因子基因诱导表皮细胞去分化的实验研究
姓名:伊海英
申请学位级别:硕士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:任明姬
20090501
中摘文要目的菇ḿ钚猿上宋赴ひ蜃踊蛘婧吮泶镌靥錺—一;将狢籦H局寥吮砥は赴鄄旎蛩彩北泶锴榭黾氨砥は赴男翁表型改变,建立基因诱导表皮细胞去分化的体外实验模型;觳釬在不同发育时期胎儿皮肤中的表达和分布,初步探索调控表皮细胞去分化的分子机制及谄し舴⑸⒎⒂械淖饔茫Q罢业骺乇砥は赴シ只哪谠谇μ峁┦笛基础,为深入研究皮肤的创伤修复与再生提供实验参考。方法慰挤肿涌寺〖际酰采用ù覲籦柿V欣┰鯾颍痹谄淞蕉艘際蠛拗菩阅谇忻该盖形坏悖玝定向插入狢亩嗫寺∥坏阒校构建真核表达质粒狢籦⒍灾刈樽咏蠨序列测定捎弥侍H痉ǎ玴—一转染至人表皮细胞系细胞中,在荧光显微镜下观察基因瞬时表达情况及细胞形态。以同期培养的表皮细胞及狢H镜谋砥は赴魑R跣远哉眨庖呦赴旧ê兔庖哂ü獗昙欠ḿ觳馐验组及对照组细胞形态的改变和细胞中纤亍癈泶锏牟钜臁采用—蚖—进一步检测狢籦H竞蟊砥は赴硇偷改变,建立基因诱导表皮细胞去分化的体外实验模型。圆煌⒂逼谔ザ肤取材、固定、制成石蜡切片,狿法检测谋泶锛胺植肌=。试残位蛟菜笮危酥时却蟆C庖呦胞化学染色结果显示,实验组细胞中、表达增强,表达减弱。免疫荧光染色结果显示,转染阳性细胞主要在细胞核、胞浆和胞膜中表达和,在胞膜上弱表达整合素,而表达为阴性—峁允荆琾—一转染后表皮细胞中、的转录水平明显上调,而的表达明显下降。检测结果表明,狢籦H竞蟊砥は赴蠧表达明显增强,而的总体表达减少狢籦H竞蟊砥は赴⑸シ化,重新获得干细胞的表达标志。咛シ⒂贔在表皮细胞表达较弱,甚至呈阴性表达。表皮分层期时,表皮层开始增厚,并可见毛囊的初级原基;诒砥げ愫兔囊初级原基内呈弱阳性表达。毛囊形成期时,毛囊的结构初步形成,体积细小,
稚;饕T诿钢氏赴诒泶铮⑶宜孀盘チ湓黾樱泶锓段е鸾ダ┐螅泶锪恐渐增多。毛囊发育成熟期后,毛囊的结构发育相对成熟,蛟诒砥げ恪⒚秆9苣皮细胞及皮脂腺的导管部均有表达,尤其在毛母质细胞呈强阳性表达。结论玝基因插入狢腸末端,可以提高在真核细胞中的表达,而且不影响其目的蛋白的结构和功能。畃—一能够转染至人表皮细胞并表达,在—一转染作用后,表皮细胞重新程序化,并获得其前体干细胞的某些潜在能力,表达表皮干细胞的一些未分化蛋白,成功建立基因诱导表皮细胞去分化的体外实验模型,为进一步阐述调控表皮细胞去分化的分子机制提供实验基础,为寻找调控表皮细胞去分化的内在驱动力提供实验参考。瓼在胎儿皮肤中的表达与分布与毛囊的发生发育密切相关谋泶锷系骺赡艽俳腋上赴脑鲋常⒂盏计定向分化形成终末组织功能细胞。关键词碱性成纤维细胞生长因子基因转染表皮细胞去分化成纤维细胞生长因子受体一咛シ⒂囱垂直匿堂陵亟±巫塞生堂焦迨塞妓堡
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英文缩略词表英文全称粘片剂氨苄青霉素碱性成纤维细胞生长因子互补脱氧核糖核酸二氨基联苯胺三磷酸脱氧核呛苷二硫苏糖醇溴化乙淀成纤维细胞生长因子受体增强型绿色荧光蛋白埃彭道夫吸管缩略语中文全称碱基数细胞角蛋白平方厘米天双蒸水焦炭酸二乙酯脱氧核糖核酸乙二胺四乙酸表皮生长因子成纤维细胞生长因子克小时一—.猺
英文全称中文全称苏木素和伊红人表皮细胞辣根过氧化物酶免疫球蛋白分钟信使攀购颂呛怂磷酸缓冲盐溶液微微摩尔,皮摩尔苯甲基磺酰氟每分钟转数,转/分逆转录聚合酶链反应缩略语狟千碱基数升培养基毫克毫升毫米毫摩尔摩尔毫微米,纳米光密度,吸光度聚丙烯酰胺凝胶电泳法聚合酶链反应藻红蛋白秒钟·!猵
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