鱼类的急性毒性实验(00002)教学案例.ppt

实验三 鱼类的急性毒性实验
指导老师：刘汝涛
山东大学环境科学与工程学院
目录
目的与要求
实验原理
实验材料
3
实验步骤
实验报告
注意事项
6
4
1
2
5
Company Logo（2）其他
溶解氧测定仪、水硬度计、温度控制仪、pH计、分析天平。
实验材料
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3．实验用水（稀释水）及水质条件
用来驯养和配置实验液的水，必须是未受污染的清洁水。一般可采用天然河水、湖水或地下水，但需过滤以除去大的悬浮物质。也可用自来水代替，但必须进行人工曝气或放置3d以上脱氯。如果试验目的是评价工业废水或化学物质对接纳水体的影响时，则最好采用接纳水体的污染源上游水作为试验用稀释水。蒸馏水不适合做稀释水，因为蒸馏水中已除去了自然界水中的盐类，与实际差距太大，另外由于蒸馏器的影响，有时使蒸馏水中带有对鱼类不利的金属离子，影响试验结果。
实验材料
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实验用水的水质条件一般是指水的温度、pH、溶解氧、硬度、水中的有机物和水量等。
（1）水温
实验中应保持鱼类原来的适应温度，一般冷水鱼在12～18℃，温水鱼在20～28℃。为使得实验结果可靠，在同一实验中，温度的波动范围不要超过4℃（即±2℃）。冬天可以通过加热室内的空气温度而达到调节水温的目的，也可以采用电热棒直接控制调节水温。
实验材料
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（2）pH
水的pH与水生生物的代谢作用有密切关系。对毒物的毒性作用也有一定的影响。因此，在实验中应维持pH在鱼类适宜范围内。～。如需调节pH，。调节贮备液的pH时不能使受试物浓度明显改变，或发生化学反应或沉淀。
（3）溶解氧
溶解氧是鱼类生存的必要条件，它能影响鱼类对毒物的敏感性。一般温水鱼要求溶解氧在4mg/L以上，冷水鱼要求溶解氧在 5mg/L以上。
（4）硬度
水的总硬度为 10～250 mg/L（以CaCO3计）。
实验材料
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1．预实验
用确定正式实验所需浓度范围，可选择较大范围的浓度系列，如1000mg/L、100mg/L、10mg/L、1mg/L、。每个浓度放入五条鱼，可用静态方式进行，不设平行组，试验持续48～96h。每日至少两次记录各容器内的死鱼数，并及时取出死鱼。求出24h100％死亡浓度和96h无死亡浓度。
如果依次预试验结果无法确定正式试验所需的浓度范围，应另选一浓度范围再次进行预试验。
实验步骤
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2．正式实验
根据预试验得出的结果，在包括使鱼全部死亡的最低浓度和96 h鱼类全部存活的最好浓度之间至少设置5个浓度组，并以几何级数排布。浓度间隔系数应≤。
每个试验浓度组应至少设2～3个平行，每一系列设一个空白对照。如使用了助溶剂，应增设溶剂对照组，其浓度与试剂中的最高溶剂浓度相同。试验鱼的数目以每组实验浓度10～20尾合适，不得少于10尾。
试验溶液调节至相应温度后，从驯养鱼群中随即取出鱼并随机迅速放入各试验容器中。转移期间处理不当的鱼均应弃除。同一试验，所有试验用鱼应30min内分组完毕。
实验步骤
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在24h、48h、72h、96h后检查受试鱼的状况。如果没有任何肉眼可见的运动，如鳃的扇动、碰触尾柄后无反应等，即可判断该鱼已死亡。观察并记录死鱼数目后，将死鱼从容器中取出。应在试验开始后3h或6h观察各处理组鱼的状况，并记录试验鱼的异常行为（如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力减弱，色素沉积、受惊吓后运动状况等）。
试验开始和结束时要测定pH、溶解氧和温度。试验期间，每天至少测定一次。
至少在试验开始和结束时，测定实验容器中试验液的受试物浓度。
试验结束时，对照组的死亡率不得超过10％。
实验步骤
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1．数据处理
以暴露浓度为横坐标，死亡率为纵坐标，在计算机或对数概率纸上，绘制暴露浓度对死亡率的曲线。用直线内插法或常用统计程序计算出 24h、48h、72h、96h的半致死浓度（LC50）值，并计算95％的置信限。