木瓜蛋白酶活力测定方法.doc

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木瓜蛋白酶活力测定方法
分别精细量取酪 z.
　　3,5-二硝基水酸生成棕红色的3-氨基-5-
　　硝基水酸，生成物颜色的深浅与复原糖的量成正比。以每克样品在一定时间生成的复原糖〔麦芽糖〕量表示酶活大小。
　　三、仪器、试剂和材料
　　
　　〔1〕电子顶载天平
　　〔2〕研钵
　　〔3〕容量瓶100mL2个
　　〔4〕具塞刻度试管25Ml15支
　　〔5〕试管8支
　　〔6〕吸管1mL3支，2mL12支，5mL1支
　　〔7〕离心机
　　〔8〕离心管
　　〔9〕恒温水浴锅
　　〔10〕分光光度计
　　
　　〔1〕1%淀粉溶液
　　〔2〕
　　〔3〕，溶解后定容至1000mL，为A
　　液。，溶解后定容至1000mL，为B液。
　　，。
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　　〔4〕3,5-二硝基水酸准确称取1g3,5-二硝基水酸溶于20mL1mol/L
　　氢氧化钠中，参加50mL蒸馏水，再参加30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水稀释至100Ml
　　，盖紧瓶塞，防止CO2进入。
　　〔5〕麦芽糖标准液〔1mg/ml〕，溶于少量蒸馏水，定容至100mL。
　　
　　萌发3天的小麦芽。
　　四、操作步骤
　　
　　称取2g萌发3天的小麦种子〔芽长1cm左右〕，置研钵中加少量石英砂和2m1
　　左右蒸馏水，研成匀浆，无损地转入100m1容量瓶中，用蒸馏水定容至100m1，每隔数分钟振荡1
　　次，提取20min。3000r／min离心l0min，转出上清液备用。
　　-淀粉酶活力测定
　　〔1〕取试管4支，标明2支为对照管，2支为测定管。
　　〔2〕于每管中各加酶液lml，在70℃℃恒温水浴中准确加热15min，钝化β
　　-淀粉酶。取出后迅速用流水冷却。
　　〔3〕。
　　〔4〕。
　　〔5〕将4支试管置另一个40℃℃恒温水浴中保温15min，再向各管分别参加40
　　℃下预热的1％淀粉溶液2m1，摇匀，立即放入40℃恒温水浴准确计时保温5min
　　。，终止酶活动，准备测糖。
　　
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