微生物实验微生物数量和大小测定课件PPT.pptx

学习使用镜台测微尺和目镜测微尺；在显微镜下测定微生物大小。
试验(一) 微生物大小测定
一、目标要求
微生物实验微生物数量和大小测定
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二、试验原理
镜台测微尺是中央部分刻有准确等分线载玻片，普通是l mm等积和容积载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数一个方法。用于细胞总数测定
显微镜直接计数法优点是直观、快速。缺点是所测得结果通常是死菌体和活菌体总和。当前已经有一些方法能够克服这一缺点，如结合活菌染色，微室培养等方法来到达只计数活菌体目标。
二、试验原理
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血细胞计数板由两条槽组成三个平台；中间较宽平台又被一短横槽隔成两半，每一边平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为八个大方格，中间大方格即为计数室。计数室是由一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；共计400个小方格。
计数时，通常数五个中方格总菌数，然后求得每个中方格平均值，以及大方格中总菌数，再换算成1 ml菌液中总菌数。
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１个计数室＝１×１mm
包含５×５个中方格
１个中方格＝４×４个小方格
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三、试验器材
1、菌种：
酿酒酵母、大肠杆菌
2、器材：
显微镜、血球计数板
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三、试验步骤
1、在10×和40×下找到计数室。
2、盖上盖玻片将摇匀酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室。
3、静置5 min，先用低倍镜将计数室移至视野中央。
4、在高倍下(40X)计数：对两个计数室记数，方法：每个计数室选5个中格(4个角和中央一个中格)中菌体进行计数 ，求得每个中方格平均值，再乘上25即为大方格中总菌数，最终换算成1ml菌液中总菌数。对于分布在刻线上细胞，依照“数上不数下，数左不数右“标准进行计数。
5、最终结果是两个计数室所记菌数平均值
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三、试验结果
1、统计每个计数室（五个中格）细胞数量
四、思索题 p56 2(1)
记数中格
1
2
3
4
5
细胞记数
2、计算每ml酵母菌悬液酵母菌数量。稀释倍数为1
记数中格
1
2
3
4
5
细胞记数
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经过细菌数量测量了解大肠杆菌生物特征和规律，绘制生长曲线。
了解光电比浊计数法原理。
学习、掌握光电比浊计数法操作方法。
试验(三) 大肠杆菌生长曲线测定
一、试验目标
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生长曲线
将少许纯种单细胞微生物接种到定量液体培养基中，定时取样测定细胞数量，以培养时间为横坐标，以菌数为纵坐标作图，得到一条反应单细胞微生物在整个培养期间菌数改变规律曲线。
二、试验原理
一个经典生长曲线分为延缓期、对数期、稳定时和衰亡期四个时期
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稀释平板计数法
对样品稀释培养，据形成菌落数计数。
优点：活菌计数方法，对设备要求不高。
缺点：操作复杂。
显微镜直接计数法
使用血球计数板在显微镜下直接计数。
优点：操作简便，计数直观。
缺点：计数结果为活细菌和死菌体总和。
测定细胞数量惯用方法
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光电比浊法
光电比浊法是利用在一定范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比原理。当细菌细胞在溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中测定时所吸收光线越多。
优点：简便快速，适合于自动控制。
缺点：测定结果受培养液成份影响；一些样品 样品不适适用此法。
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菌种
培养不一样时段大肠杆菌。
仪器或其它用具
分光光度计，比色皿等。
三、试验器材
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开电源，仪器预热20 min，将波长调至600 nm处。
打开样品室，将档光体插入比色皿架，将其推或拉入光路。
盖好样品室盖，在T MODE下，按0%T键调零透射比。
取出档光体，按100%T/OA键调100%透射比。
四、试验步骤

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将参比溶液（未接种LB液体培养基）以及被测溶液倒入比色皿中。
打开样品室盖，将参比溶液放在样品架第一个槽位中，将被测溶液依次放入其它槽