常用染色方法 (2).doc

常用染色方法
过氧化酶染色法(POX)2
铁染色法2
碱性磷酸酶染色法(NAP)3
糖原染色法(PAS)4
非特异性酯酶染色法5
酸性磷酸酶染色法(ACP)5
苏丹黑B染色法6
阿利新染色法6
中性粒细胞中毒颗粒染色法血病反应、真性红细胞增多症、骨髓硬化症，急淋、多发性骨髓瘤、再障等，在急性和慢性粒细胞白血病、病毒感染、PNH时，碱性磷酸酶活性显著降低，急单的酶活性亦低，因此，中性粒细胞碱性磷酸酶反应，有助于粒细胞性的白血病与类白血病反应的鉴别，有助于病毒感染和细菌感染的鉴别。
糖原染色法(PAS)
一、原理：过碘酸时一种氧化剂，它能打断各种物质内的C-C链，当乙二醇基（CHOH-CHOH）存在时，能使其变为二醛（CHO-CHO），醛再被进一步氧化而与雪夫氏试剂中的无色复红结合成红色的化合物，红色反应的深浅有赖于组织内α-醇基的多少。除糖原能与过碘酸反应的还有粘蛋白、粘多糖、糖蛋白、糖脂类、不饱和脂肪酸类和磷脂。但糖原能被唾液淀粉酶消化，其它阳性物质不被消化，故将经过唾液处理后的涂片，再经PAS染色可以鉴别之。
二、试剂
1、1%过碘酸（新鲜配制）：+蒸馏水50ml
2、雪夫氏试剂
配制方法1：（）放置于已加热60℃416ml（52ml）蒸馏水中使其全部溶解，偏重亚硫酸钠或重亚硫酸钾16g（2g），1N的HCL80ml（10ml），静置片刻后加活性炭4g（2g），振荡2-3分钟过滤后无色即可用。如仍有红色，再加适量活性炭。
（1N盐酸配制：）
方法2：
碱性复红：1g
当量盐酸：20ml（浓盐酸2ml）
无水亚硫酸钠：1g
活性炭：2g
蒸馏水：200ml
将蒸馏水煮沸后加入复红，冷至50℃时加入当量盐酸，再冷至25℃加入亚硫酸钠，摇匀将瓶盖塞紧，置于暗处，24小时后加入活性炭。振荡后过滤使用，盛于有色瓶中密封冷藏，可保存数月。
3、1%甲基绿：2g+蒸馏水200ml，充分溶解后放入分液漏斗中以每次少许氯仿，以除去甲基紫至氯仿无色为止。
三、操作
1、血片或骨髓片在空气中干燥后，用甲醇固定5分钟（或95%乙醇）
2、过碘酸作用10分钟
3、水洗5-10分钟
4、雪夫氏试剂作用30分钟（置暗处）
5、水洗5-10分钟
6、甲基绿复染30分钟
7、水洗待干镜检
四、结果
细胞核无色，浆与颗粒部分呈红色，复红颗粒色深浅及颗粒多少而决定积分。
细胞浆内无染色颗粒为0分
细胞浆内微红颗粒染色不显著或1-10颗粒，为1分或（+）
细胞浆内染浅红色，有少数染红色颗粒或10-20颗，为2分或（2+）
细胞浆内染深红色，有的成较粗的块状或20-30颗，为3分或（3+）
细胞浆内染深红色块状，颗粒在30个以上充满胞浆，为4分或（4+）
非特异性酯酶染色法
一、原理：α-乙酸茶酚酯酶将乙酸茶酚水解，再与重氮盐（如坚牢蓝B）偶联，生成不溶性的有色（灰色或棕黑色）沉淀
二、试剂配制
1、10%甲醛生理盐水
2、基质液制备
（1）
M/15 Na2HPO4
Na2HPO4

80ml
蒸馏水
250ml
M/15 KH2PO4
KH2PO4