低氧降低肺癌A549细胞对培美曲塞的药物敏感性.pdf

万方数据
低氧降低肺癌细胞对培美曲塞的药物敏感性葛若木合，孙晓梅芮，汪渊潘孛肺癌严重危害人类的健康，其发病率、病死率都组织病理学分类可分成非小细胞肺癌，欠伟┑某Ｓ没埔┪铮庵只埔┪胞内叶酸依赖性的正常代谢过程，抑制细胞Ｄ壳傲俅采螾魑R幌低氧细胞组，��常规培养，置于低氧培养箱中；低氧溶剂组，��细胞培养基中加人��后低氧培养；低氧加溶液，并将��细胞置于低氧培养箱中培养。�，��比色法用完全养基培养��细胞至对数生长期，然后消化细胞。�的细胞沉淀，制备成单细胞悬液，并计数。在�孔培养板中接种细胞，每个孔大约�块�孔培养板，然后置于常氧培养箱中继续培养，至细胞贴壁，约��Ｓ猛耆�嘌��渲贸刹煌�┪�浓度�、��、�������穖�／�，然后用这些不同药物浓度的培养基进行换液，另外设置细胞对照组和溶剂对照组，前者用不加药物的完全培养基进行换液，后者用加人��溶剂的完全培养基进行��缓竺靠准尤��組�，�试剂，在细胞培养箱内继续孵育��Ｋ婧笕〕雠嘌�澹��靠字�的培养基用枪头吸出，然后每个孔再加入��穕��，用酶联免疫检测仪在���波长处测定各����旧ńń嗑桓遣Ｆ�哐姑鹁�笥��％乙醇中浸泡，移人超净台内用酒精灯烘干。将盖玻片夹除放于�装迥冢�缓笾秩讼赴��笤��％的密度。再分别用完全培养基、加入��和�的完全培养基换液培养����嘌���觯����后弃去固定液，磷酸盐缓冲液����遍后吸出����洗涤时用摇床晃动。加入�����旧�海�旧���Ｓ靡〈不味��危�����遍后吸出��Ｏ�涤时用摇床晃动。在载玻片上滴�慰褂ü獯忝鸱�片液，细胞的一面盖向载玻片，让细胞接触封片液，注意不要有气泡产生。用荧光显微镜观察，激发波��检测��细胞在�装迥�生长密度达�％后，���次，将长满��细胞的�装宸旁诒�希���斗��鞍酌敢种萍恋牡���螅�孟赴�谓��诘南赴�刮下来，收集细胞蛋白于�管中，����∩锨逡海�肂�法测定蛋白浓度，根据测出的蛋白浓度数值，将不同分组的细胞，用蛋白裂解液配成同体积同浓度液体，再加上蛋白存。配制��甈���海�鞍咨涎��械缬荆�孔�蛋白上样量保持一致，然后转移到��膜上。置于封闭液中在摇床上室温封闭�脂牛奶，一抗�嬉〈卜跤��梗��故椅路跤�后进行显影。用������砑�治龈魈醮�幕�度值，并计算。分析，实验数据均用�纒表示。组间比较采用单因素方差分析，����2钜煊型臣蒲б庖濉�实验适宜的�浓度筛选用��比色法筛选�适宜实验使用浓度，�的增殖有抑制作用，并与作用时间和作用浓度呈正���疞的药物浓度下作用�胞的抑制率达到�％左右，因此选取此浓度作为实��主要仪器酶标仪�秃牛篢�����拦鶷��������本┝�灰瞧���方法��培养基四甲基偶氮唑蓝�����痬�离心����占�恋淼南赴�Ｓ猛耆�嘌��匦�胄墓苤���觯�布浦�换液。�榕嘌�宸直鹬糜诔Ｑ跖嘌�渲屑绦�嘌�孑��舛取��固定液，���������，��洗�弃去染色液，���长���左右，发射波长���左右。白裂解液，裂解���胄��上样缓冲液，混匀，然后煮沸使蛋白变性，一�℃保��獗找何�％脱��统计学处理采用���．�砑��惺���峁��对��细胞比，在��螅珹���验的药物浓度。见图��安徽医科大学学报�������、�·�������．������．��、���