实验六微生物大小及数量的测定.ppt

实验六微生物大小及数量的测定
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镜台测微尺
目镜测微尺
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目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差，因此在使用前必须用镜台测微尺进行校实验六微生物大小及数量的测定
第一页，课件共12页
镜台测微尺
目镜测微尺
第二页，课件共12页
目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差，因此在使用前必须用镜台测微尺进行校正。
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目镜测微尺的校正
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三、操作步骤
l． 目镜测微尺的标定 把目镜的上透镜旋开，将目镜测微尺轻轻放在目镜的隔板上，使有刻度的一面朝下。将镜台测微尺放在显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上。先用低倍镜观察，调焦距，待看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度相平行，并使两尺左边的一条线重合，向右寻找另外一条两尺相重合的直线。
2．标定公式：
计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10µm，所以可得：
目镜测微尺每格长（μm）=
两条重合线间镜台测微尺的格数×10
两条重合线间目镜测微尺的格数
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三、操作步骤
3．菌体大小的测定 将镜台测微尺取下，换上酿酒酵母玻片标本，分别在低倍镜和高倍镜下找到目的物，测量10～20个菌体的长和宽占目镜测微尺的格数，再以目镜测微尺每格的长度计算出菌体的长和宽。记录结果,求出平均值。
镜台测微尺的玻片很薄，如需标定油镜头时，要格外注意，以免压碎镜台测微尺或损坏镜头。
思考题
为什么不同放大倍数的目镜和物镜必须分别进行标定？
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酵母菌数量的测定  

一 、目的要求
1．明确血球计数板计数的原理。
2．掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。
二 、 基本原理
用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，各列有一个方格网，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度一般有两种规格，一是大方格分成25个中格，而每个中格又分成16个小格；另一种是大格分成16个中格，而每个中格又分成25个小格，每个大格中的小格都是400个。每一个大格边长为lmm，面积为lmm2，，。
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血球计数板计数
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计数时，通常数五个中格的总菌数，然后求得每个中格的平均值，然后再换算成lml菌液中的总菌数。
如果是25个中方格的计数板,
1mL菌液中的总菌数=A/5×25×104×B=50000A·B（个）
A为五个中方格中的总菌数，B为菌液稀释倍数.
如果是16个中方格的计数板，
1mL菌液中的总菌数=A/5×16×104×B=32000A·B（个）
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（三）器材
1．菌种 酿酒酵母
2．仪器或其他用具 血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细滴管。
（四）操作步骤
l．菌悬液制备
以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。
2．镜检计数室
在加样前，先对计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，
吹干后才能进行计数。
3．加样品
将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细
滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘凹槽滴加,菌
液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均
能充满菌液。
取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生。
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4．显微镜计数
加样后静止5min，然后将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。
每个计数室选5个中格(可选4个角和中央的一个中格)中的菌体进行计数。压线的菌体一般记上不记下,记左不记右。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。
5．清洗血球计数板
使用完毕后，将血球计数板在水龙头用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。
思考题