bd流式细胞仪.doc

目录
简介流式细胞仪……………………………………………………3
流式细胞仪的临床检验工程
淋巴细胞亚群分析……………………………………………………………4
肿瘤细胞DNA检测分析………………………………………………………5
白作时，先将实体组织制备成单细胞悬液，用固定或去污剂在细胞膜上打孔，使DNA特异的荧光染料如PI〔碘化丙啶〕导入细胞核，PI和DNA缄基对特异结合后上机检测PI的荧光强度，并进展数据分析。
应用实例：乳腺癌病人的手术标本分析图。
*其中红色群体为二倍体，黄色群体为异倍体。
白血病和淋巴瘤免疫分型
正常白细胞在其分化过程中，随着系列的不同、成熟阶段的差异，会在细胞膜外表表达不同的分化抗原。白血病细胞则在癌变的过程中，丧失了正常细胞底系列专一性和分化阶段规律性，在本质上有别于正常骨髓细胞。应用此特点可进展免疫表型分析，以鉴别各种白血病和淋巴瘤，辅助临床诊断、评估疗效和预后。
常用的抗原包括：CD3、CD5、CD7、CD19、CD20、CD22、CD10、HLA-DR、
CD13、CD14、CD33、CD34、GLY-A、MPO等等。
应用实例：利用CD45三色分析急性髓性白血病。
* 左图为正常骨髓，绿色为正常淋巴细胞，深红为单核细胞，玫瑰红为成熟粒细胞，浅蓝为有核红细胞，深蓝为未成熟细胞；右图为急性髓性白血病图形，可见与正常明显的差异。
剩余白血病检测
剩余白血病是指经过适当的治疗、疾病缓解后仍残留在病人血中的极少量白
血病细胞。通常白血病病人经过化疗后的疾病复发率为60-80%，经过自体或异体骨髓移植后的复发率仍偏高〔20-50%〕。所以如果能早期检测到复发的迹象，即白血病细胞的再增生，则可以提前给予病人及时恰当的治疗。
依照不同的白血病，选用不同的抗体组合〔如下表〕来检测剩余白血病。流式细胞术可在一万个骨髓细胞中检测到一个白血病细胞；尤其是TdT的应用大大提高了检测灵敏度。
白血病种类
可选择的抗体组合
T-ALL
cyto CD3/TdT
B-ALL
CD13/TdT，CD33/TdT
Pre-B-ALL
cyto μ/TdT
AML
CD13/TdT， CD33/TdT， CD7/TdT
5、网织红细胞分析
网织红细胞计数是骨髓红细胞造血功能的重要指标。传统手工计数耗时耗力，缺乏准确性。流式细胞仪网织红细胞计数系统由于采用系统试剂与全自动软件，可在短时分析大量细胞，低水平网织红细胞也可到达统计分析精度，省时省力，结果正确可靠。
* 左图中红色群体为红细胞，右图利用RNA染料噻唑橙〔TO〕区分成熟红细胞和网织红细胞。
6、造血干祖细胞检测
在治疗恶性血液病时，大剂量化疗或放疗摧毁有病的骨髓后，干细胞移植保证了安康的干祖细胞重建骨髓，产生正常的血细胞，实体肿瘤病人亦可通过干细胞移植抗衡大剂量化疗导致的致死性血液毒性。与大剂量化疗相配合的干细胞移植已在临床大大提高了*些肿瘤病人的长期存活率，如乳腺癌、儿童神经母细胞瘤、卵巢癌等。另外，干细胞移植与再生障碍想贫血、免疫缺隐、血红蛋白病等非恶性造血系统疾病治疗的相关性也正在研究中。
* 上图中红色群体是经过多参数设门后准确设定的CD34阳性细胞群体，绿色局部是进展定量计数的标准微球。
7、血小板疾病及活化血小板检测
通过血小板膜糖蛋白的检测可以诊断先天性或获得性血小板疾病如Bernard-Soulier综合征〔CD42b-42a〕，血小板无力症〔CD41-CD61〕，免疫性血小板减少等等。
评价血小板活化程度的应用领域包括：缺血性冠状动脉疾病如心绞痛、心肌梗死、血管成形术、心肺旁路术等；缺血性脑血管病如脑堵塞、TIA、脑动脉硬化等；糖尿病；恶性肿瘤；高血压病；高脂蛋白血症；高粘滞血症；抗血小板药物机制研究与疗效监测；吸烟；情绪性应急等。
应用实例：CD61/CD62P/PAC-1三色标记分析血小板活化。
8、HLA-B27检测
由流行病学统计结果显示，HLA-B27基因型阳性的人患数个遗传性免疫疾病的机率，比一般人要高很多，以强直性脊柱炎为例，约为87倍。因此HLA-B27检测可以有效帮助临床鉴别诊断强直性脊柱炎等血清阴性骨关节疾病。其他相关性疾病有：遗传性关节炎如Reiter’s综合征, 反响性关节炎，肠性关节炎等。
检测时选用CD3/HLA-B27双标记抗体，圈定T淋巴细胞亚群，再分析其细胞外表是否表现HLA-B27组织抗原。因为T细胞外表只表达ClassⅠ型HLA抗原，可防止ClassⅡ型HLA抗原引起的误差。应用此法无需别离细胞，比传统的微量细胞毒实验节约时间，且检测结果更敏感、客观、容易判读。
9、 器官移植的配型及免疫状态监控