FISH痰脱落细胞检查诊断肺癌的价值.ppt

FISH痰脱落细胞检查诊断肺癌的价值王飞。盂涛。杨佳,穆朝东(新疆医科大学附属肿瘤医院,鸟鲁木齐830011) 娄全博?摘要:目的探讨荧光原位杂交技术(FISH)痰脱落细胞检测诊断肺癌的价值。方法分别采用FISH、常规痰脱落细胞学检查(常规方法)检测60例疑似肺癌患者3、7、17染色体和9号染色体p16位点异常,以病理诊断为金标准,分析FISH、常规方法及二者联合检测诊断肺癌的敏感度和特异度。结果病理诊断为肺癌43例,肺良性病变17例。%、%,P=;%、100%,P= l;常规方法+%、100%,与常规方法相比,P分别=0、l。FISH与常规方法检测对TNM分期为I~Ⅱ%、%,P=;Ⅲ~IV期的敏感性分别为72%、40%,P=;常规方法+FISH联合对TNM分期为I~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ%、76%,与常规方法相比,P分别=、。FISH、常规方法及二者联合检测对肺癌分期的诊断特异性无统计学差异。结论FISH诊断肺癌的敏感性明显高于常规方法,与常规方法联合检测可显著提高痰液标本诊断肺癌的准确性。胸片、CT及痰细胞学检查为目前肺癌早期的主要筛查手段,但特异性及敏感性均较低,早期漏诊率高;而大部分肺癌患者就诊时病情已发展到晚期,病死率高。荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是近年发展起来的一项新技术,其可迅速检测出中期分裂相/间期核细胞中染色体数目等异常变化,为肺癌的遗传学研究提供了新方法。本文就采用双色FISH技术检测了60例初诊疑似肺癌患者痰液中脱落细胞3、7、17染色体和9号染色体P16位点异常情况,并以组织病理确诊为肺癌金标准,探讨FISH技术在肺癌诊断中的应用价值。? 临床资料60例初诊疑似肺癌患者,男42例,女18例;年龄46—76岁,中位年龄63岁。长期吸烟35例,有慢性咳嗽咳痰病史47例。经病理或细胞学检查诊断证实为肺癌43例(肺癌组),其中鳞癌26例、小细胞肺癌6例、腺癌11例;TNM分期I一Ⅱ期(早期)18例,Ⅲ~Ⅳ期(晚期)25例。肺良性病变17例(良性组),其中结核10例,肺炎7例。另选取同期20例体检健康者为对照组,年龄4l一80岁,中位年龄61岁。 痰脱落细胞检查收集三组新鲜痰液标本(取清晨漱口后深部第2、3口痰,连续3d,留置于无菌瓶中),每例收集约20 mL,分为两等分各10 mL,分别用于FISH检测和常规痰脱落细胞学检查(常规方法)。 FISH检测标本处理1) 将10ml痰液放入5~10ml消化液中,摇匀,静置,去上清,离心,留取细胞沉淀2) 加入预热的胶原酶B,吹打,水浴,离心,去上清,\L的KCL低渗液3) 放入37℃水浴箱低渗30分钟4) 取出后加入新鲜固定液5ml,混匀,静置,离心,去上清5) 缓慢加入5ml固定液,静置10分钟后离心6) 去除上清液加固定液离心(重复2~3次直到细胞成分洗干净为止)玻片制备1) 滴制备好的细胞样本到载玻片上(用显微镜观察细胞分布情况)2) (胃蛋白酶工作液)在2×SSC(pH )液中浸泡2分钟3) 依次在70%、85%、100%的乙醇中浸泡2分钟, 对照组痰脱落细胞染色体数目畸变的阈值(畸变率) 对采集的20例正常人痰液每组探针组合分析100个细胞。统计出现不同异常情况的百分比,阈值=平均数(M)+3×标准差(sD),3、7、17号染色体探针各需要建立2个阈值(1个点、≥3个点),9p16探针需要建立3个阈值(0、1、≥3个点)。任意≥2个位点出现异常(3号和17号染色体出现非整倍增加)可判断为阳性;一个位点有≥2种异常(9p16有0信号点异常和3信号点异常)也可判断为阳性。