清洗与消毒课件.ppt

关于清洗与消毒
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清洗和消毒是否彻底直接关系到细胞培养的成败。掌握清洗、消毒知识，学会清洗、消毒方法是细胞培养工作的基本功。
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一、 清洗
、清洗目的：去除杂物，降低带菌量防止消毒灭菌后再次遭受污染，所以经清洗烤干或晾干的器材，应严格包装后再行消毒灭菌处理。
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（二）、试验材料的清洗
清洗目的：来自自然界的试验材料，包括来自土壤中的幼茎、磷茎，滋生着各种微生物，尤其是细菌的芽孢和真菌的孢子，一旦与培养基接触，就会很快的繁殖起来，造成培养基和培养材料的污染。
清洗方法：先用自来水冲洗5分钟，然后用中性洗涤剂清洗，注意勿损伤试验材料。再用自来水流水冲洗半小时，用于下一步的药剂灭菌。
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二、消毒灭菌
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（一）关于有菌和无菌的概念
有菌的范畴：
凡是暴露在空气中的物体，至少其表面都是有菌的，如动植物的表面、超净工作台的台面，未处理的工具和手等。
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高压高温处理（工具、器皿、培养基等）
物理或化学处理；
火烤后的物体；
健康的动植物不与内外部表面接触的组织
内部可能是无菌的
无菌的范畴：
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 消毒、灭菌的对象：
★ 接种室
★ 材料（外植体）：
完全杀死材料表面的微生物过程：
洗洁精→酒精→氯化汞等
★器皿用具消毒（灭菌）
★ 培养基
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（二）灭菌、消毒技术作用和意义
细胞培养中，凡用于培养和无菌操作的房间、器具、培养瓶、培养基，培养材料和操作者的衣物和手都应随时进行灭菌，以确保不受杂菌污染，否则，由于杂菌的生长繁殖速度一般都比培养的组织快得多，最终将把组织全部杀死，这些污染微生物还可能排泄对动植物组织有毒的代谢废物，因此在培养容器内部保持一个完全无菌的环境是绝对必须的。
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（三）灭菌、消毒种类
化学消毒方法指使用化学药物杀灭、清除环境中的致病性微生物及其他有害微生物，或者抑制其生长、繁殖。
物理消毒法是指利用物理因素杀灭或消除病原微生物及其他有害微生物的方法。
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◆ 滤过除菌
此法适用于消毒大多数细胞培养用液，如培养液、消化液、Hanks液、血清以及其他不能用高压蒸汽消毒的液体。。
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◆ 紫外线
适用于无菌室、超净工作台的消毒。
紫外线的波长为200-300nm，最强是在254 nm，6-15平方米最少一只紫外灯，，湿度45%~60%，杆菌效果好，球菌次之，霉菌、酵母菌最差，实验前应不低于30分钟的照射时间。
优点：消毒效果好，面种大，使用方便。
缺点：产生臭氧、气味难闻。
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◆ 煮沸消毒
金属器械和胶塞在水中煮20~30分钟，趁热倾去水分即可使用。紧急情况时使用。
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2 化学消毒
化学药品消毒灭菌法是应用能杀死微生物的化学药物进行消毒灭菌的方法。实验室地面、桌面、用具及洗手用的溶液均常用化学药品进行消毒杀菌。
2%煤酚皂溶液（来苏尔）
%新洁尔灭
1%升汞
3~5%甲醛溶液
75%酒精。
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外植体在接种之前，须经严格的灭菌，同时又要注意不损伤外植体。不同灭菌药剂杀菌力不同，故在使用不同的药剂时，需要考虑使用浓度和处理时间，对不同植物种类的不同外植体，处理也有不同。
另外，外植体在进入消毒剂之前，应认真取材及清洗，尽可能地减少其带菌量。
附加：外植体除菌注意事项：
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消毒剂 使用浓度(％) 消毒时间(分) 效果 残液去除难易
次氯