微囊藻毒素暴露及谷胱甘肽基因多态性与儿童肝损伤关系.pdf

第三军医大学硕士学位论文11本研究以重庆市涪陵区为研究现场,采用整群抽样的方式,随机选取涪陵区5所中小学共1441名儿童为研究对象,通过问卷调查方法收集人群年龄、饮用水来源、饮水量和既往病史等一般特征信息。2. 三种饮用水来源当地儿童饮用水有三种,一是井水,井水中未曾检测出MCs;二是湖一水,该湖虽然存在MCs污染,但均在国标饮用水MCs限值1μg (MC-LReq)/L以内;三是饮用湖二水,该湖MCs污染比较严重, (MC-LReq)/L,是国标饮用水MCs限值的4倍。因此,我们推测该地区存在MCs暴露不同程度的人群,是开展水环境中MCs暴露及人群健康损害评价的较好现场。根据问卷调查的结果,将整个人群分为MCs高、低暴露组以及对照组三组。3. MCs内外暴露水平检测2005-2009年,每年10月采集涪陵区两湖及井水水样,并于2009年10月捕获两湖中的6种水产品(5种鱼类和1种鸭类),同时抽取每名儿童3ml静脉血。上述水样、水产品以及血样经过萃取和纯化等前期处理后,采用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测以上样本中MC-LR浓度。4. 肝功酶检测2009年10月抽取每名儿童3ml静脉血,运用全自动生化分析仪检测血清中谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase, AST)、谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase, ALT)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, ALP)和谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltransferase, GGT)。5. 乙肝病毒检测同时抽取每名儿童3ml静脉血,采用ELISA试剂盒检测血清中HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb。二、GSTs基因多态性与MCs致肝损伤易感性的病例对照研究1. 病例对照人群筛选根据问卷调查和肝功能酶学检测结果,在MCs暴露人群中排除乙肝感染、服用肝毒性药物等其他因素影响后,选择81名肝功酶异常的人群为病例组,同时随机选取92名肝功酶正常的人群作为对照组,进行病例对照研究。2. DNA提取及基因型检测2009年10月抽取每名儿童3ml静脉血,采用血液基因组提取试剂盒提取DNA,以β-Globin为内对照与GSTT1、GSTM1同时扩增进行多重PCR检测。三、数据统计方法第三军医大学硕士学位论文12采用SPSS ,在现况调查中根据数据分布特点,分别采用一般频数描述、χ2检验、Kruskal-Wallis检验和多因素方差分析等方法进行统计分析。在病例对照研究中采用χ2检验比较两组基因型的分布特点,人群特点采用t检验和χ2检验进行比较,P<。研究结果:一、,拒绝参加该研究的有24名儿童( %),未能完成问卷调查或者抽血检测的有43名( %),另外未满足研究纳入标准的有52名( %),最终有1322名儿童完成了本研究的全部步骤。在三组人群基本情况比较中,年龄(p=)和被动吸烟状态(p=)显示有统计学差异,而性别比例、乙肝感染、身高体重指数(body mass index, BMI)、水消费量和水产品消费频率等均没有统计学差异(p﹥)。,分别为BMI、HBV感染、MCs暴露、肝毒性药物、剧烈运动和被动吸烟。在具有统计学差异的危险因素中,OR值最大的是HBV感染(OR=,p=),其次是肝毒性药物(OR=,p=)和MCs暴露(OR=,p=),其他因素如被动吸烟(OR=,p=)、BMI (OR=,p=)和剧烈运动(OR=,p=)在本研究中未发现与肝损伤存在关联。-LR内外暴露水平水中MC-LR浓度:2005~2009年,湖一和湖二水中MC- μg (MC-LReq)/ (MC-LReq)/L,而井水中只在2008年检出, (MC-LReq)/L。其中2008年湖二水中MCs浓度最高, μg (MC-LReq)/L。水产品中MC-LR浓度:鱼禽肌肉和肝脏样本中均检测出了MC-LR,肝脏中MC-LR浓度均高于肌肉中MC-LR的浓度;对于同类水产品而言,湖二的水产品无论是肌肉中还是肝脏中MC-LR浓度均高于湖一的水产品;湖一和湖二水产品肌肉中MC-