实验二过氧化氢酶Km值的测定.docx

实验二过氧化氢酶Km值的测定.docx精品文档
精品文档
1
精品文档
教案首页
第 2 次课 授课时间：2006年11月5日～11月9日
课程名称 生物化学与分子生物学实验课 年级 2006 专业、层次 临床医学本科
授课教师 许成山 职称 助教 课型(精品文档
精品文档
1
精品文档
教案首页
第 2 次课 授课时间：2006年11月5日～11月9日
课程名称 生物化学与分子生物学实验课 年级 2006 专业、层次 临床医学本科
授课教师 许成山 职称 助教 课型(大、小) 小 学时 3
授课题目（章、节） 实验二 过氧化氢酶Km值的测定
基本教材或主要参考书 自编生物化学与分子生物学实验指导
教学目的与要求：
1、巩固酶促反应有关参数的知识，加深理解 Km值的定义；
2、学习Hanes作图法测定Km值的原理和方法；
3、掌握滴定管的使用和滴定终点的判断。
大体内容与时间安排，教学方法：
1、Km值的定义及求Km值的作图方法（林-贝氏作图法和Hanes作图法） 5min
2、过氧化氢酶Km值测定的原理 5min
3、过氧化氢酶Km值测定的注意事项 10min
4、学生做实验 100min
教学方法：实验+示教
教学重点、难点：
重点：1、Hanes作图法求Km值
2、过氧化氢酶Km值测定的原理
3、滴定管的使用和滴定终点的判断
难点：过氧化氢酶 Km值测定的原理
教研室审阅意见：
教研室主任签名：
年 月 日
1
精品文档
精品文档
3
精品文档
基本内容 手段
一、Km值的定义：
提问
二、Km值的作图方法
（一）双倒数作图法 简图
（林－贝氏作图法）
（二）Hanes作图法 简图
三、过氧化氢酶Km值测定的原理
示范操
作
四、实验操作
在实验
过程中
进行巡
五、注意事项 视，注意
纠正学
生的不
规范操
作
六、实验结果
七、学生做实验

课堂设计和时间分配
1min
当酶促反应速度等于最大反应速度一半时的底物浓度即为Km值；Km值是酶促反应的特征性常数。
4min
以1/[S]为横坐标，以1/V为纵坐标求Km值。
[S]/V为横坐标，以[S]为纵坐标求Km值。
5min
1、H2O2在过氧化氢酶的作用下分解生成了 H2O和O2；
2、[S]=加入的H2O2的量；
3、V=固定时间内反应掉的 H2O2的量=加入H2O2的量－
剩余H2O2的量；
4、剩余H2O2的量可通过KMnO4滴定测出：
2KMnO4+5H2O2+3H2SO4→2MnSO4+K2SO4+5O2+8H2O
1、只做第3步；
2、表格下：将各瓶置于37℃水浴预热5min改为室温摇匀。
10min
1、加入1:；
2、硫酸的浓度较大，小心不要溅出 !!!
3、作图应该用坐标纸，标明有关参数
4、滴定操作：
（1）使用滴定管前要先检查滴定管是否漏水或有堵塞；（2）滴定管使用前还要润洗（加KMnO4至刻度线24ml
处；
（3）使用时，不