复方半边莲抑菌机制及饮片有效期的研究.pdf

单位代码10475学号104753101270分类号R917硕士学位论文复方半边莲抑菌机制及饮片有效期的研究学科、专业:药物分析研究方向:药品质量监控及体内药物分析申请学位类别:医学硕士申请人:薛志平指导教师:刘杰教授康文艺教授二〇一三年五月ANTIBACTERIAL MECHANISM OF FUFANGBANBIANLIAN AND STUDY ON HERBAL PIECESSTABLE LIFEA Dissertation Submitted to the Graduate School of Henan Universityin Partial Fulfillment of the Requirementsfor the Degree ofMaster of MedicineByXue Zhiping Supervisor: Prof. Liu Jie and Kang WenyiDate:May, 2013I摘要本论文共分为三章。第一章主要从碱性磷酸酶(AKP)、电导率、胞外蛋白含量和SDS-PAGE电泳分析四个方面研究了复方半边莲中木犀草素和黄芩素分别对金黄色葡萄球菌(SA)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和β-内酰胺酶阳性金黄色葡萄球菌(ESBLs-SA)的抑菌机制;第二章采用初均速法研究补骨脂和金银花的有效期,用经典恒温加速法研究杭白菊和贡菊的有效期;第三章综述了目前中药饮片有效期的研究进展。第一章复方半边莲抑菌机制的研究复方半边莲由半边莲、半枝莲和白花蛇舌草组成,具有抗菌和抗病毒作用。本章从复方半边莲的化合物中进行抗菌活性筛选,最终确定了通过测定AKP的含量变化、电导率变化、胞外蛋白含量变化和SDS-PAGE电泳分析研究木犀草素和黄芩素对SA、MRSA和ESBLs-SA的抑菌机制来探讨复方半边莲的抑菌机制。采用纸片扩散法(K-B)测定了木犀草素和黄芩素的抑菌圈和最低抑菌浓度(MIC)值;液体培养法测定了木犀草素和黄芩素的半数抑制浓度(IC50)。结果显示,木犀草素在浓度为10 mg/mL时对SA(抑菌圈为17mm,MIC= mg/mL)的抑制作用略强于MRSA和ESBLs-SA(抑菌圈为16mm,MIC= mg/mL);IC50显示,木犀草素对SA、MRSA和ESBLs-±、±±。黄芩素在浓度为10 mg/mL时对SA和MRSA(抑菌圈为12mm,MIC=)的抑制作用略强于ESBLs-SA(抑菌圈为11mm,MIC= mg/mL);IC50显示,黄芩素对SA、MRSA和ESBLs-±、±±。抑菌机制的研究结果显示,经木犀草素和黄芩素作用后,SA、MRSA和ESBLs-SA的AKP、电导率及胞外蛋白含量均增大,SDS-PAGE电泳图显示蛋白谱带也明显发生变化,说明木犀草素和黄芩素可能破坏了细菌细胞壁和细胞膜的结构,导致细胞膜通透性增加,进而使细胞内容物外泄;同时推测木犀草素和黄芩素对细菌蛋白质的合成有一定II影响,使菌体内蛋白质减少,影响和阻碍细胞内蛋白质的表达,最终导致细菌正常生理功能受损或丧失。第二章中药饮片有效期的研究本章采用初均速法预测补骨脂和金银花的有效期,采用经典恒温加速法预测杭白菊和贡菊的有效期。建立HPLC 法,测定补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量,并分别进行了方法验证学考察,以补骨脂素和异补骨脂素总含量为指标,采用初均速法测得补骨脂在25℃。结果显示补骨脂需室温保存。建立HPLC 法,测定金银花中绿原酸含量,并进行了方法验证学考察,以绿原酸为指标,采用初均速法测得金银花在25℃。结果显示金银花需室温保存。建立了HPLC法,测绿原酸、木犀草苷和3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸在杭白菊和贡菊中的含量,并进行了方法验证学考察,以3种化合物为指标,采用经典恒温加速法预测杭白菊和贡菊在室温下的有效期。结果显示在25 ℃;。这说明杭白菊和贡菊需避光阴凉处保存。第三章中药饮片有效期的研究进展本章通过对中药饮片有效期的有关文献的检索,综述了中药饮片有效期的研究进展。关键词:抑菌机制,木犀草素,黄芩素,有效期,补骨脂,金银花,杭白菊,贡菊IIIABSTRACTThis dissertation posed of three chapters. The first chapter introduced the antibacterial mech