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穿心莲内酯对HL
摘要】目的：研究穿心莲内酯诱导人HL-60细胞凋亡及相关机制。方法：以人早幼粒白血病细胞株HL-60为模型，作用于HL-、、，实验分为溶媒对照组、穿心穿心莲内酯对HL
摘要】目的：研究穿心莲内酯诱导人HL-60细胞凋亡及相关机制。方法：以人早幼粒白血病细胞株HL-60为模型，作用于HL-、、，实验分为溶媒对照组、、、。采用AnnexinV/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率、、、。用DMSO溶解穿心莲内酯为50mg/ml贮存液，所需浓度在实验前用RPMI1640培养基稀释生成。实验分为溶媒对照组、、、。-60细胞24h凋亡率把对数生长期的HL-60细胞浓度调整为1×106个/ml，以1ml/孔接种于6孔板内，参加不同浓度的穿心莲内酯，作用24h后离心收集细胞，PBS液洗涤细胞两次，按照AnnexinV/PI双染法〔试剂盒购自武汉博士德生物技术〕步骤操作，1h内上流式细胞仪进行检测，。、接种、加样品同上。穿心莲内酯作用HL-6024h后收集细胞，800rpm离心5min后，用250μlPBS液清洗2次后重悬细胞于流式管中，参加20μl荧光标记的Cytc〔购自Abzoom公司〕，上流式细胞仪进行检测。，用x±SD表示所有实验数据，-60细胞24h凋亡定量检测结果显示，和溶媒对照相比，穿心莲内酯各浓度作用于HL-6024h后，各组细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率及坏死率均随着穿心莲内酯浓度的升高逐渐升高，量效关系明显；与溶媒对照相比，中、高浓度早期凋亡率、晚期凋亡率及坏死率差异有统计学意义〔P＜〕。见表1。-60细胞24hCytC蛋白表达变化结果说明，与溶媒对照相比，不同浓度的穿心莲内酯作用HL-60细胞24h后，CytC蛋白表达逐渐增加，说明穿心莲内酯作用后CytC从线粒体膜间隙释放到胞浆内的量逐渐增加。见表2。恶性肿瘤是威胁人类健康的主要疾病之一，可发生在任何年龄段，发病率高，预后不良。不断开掘疗效好、毒副作用低的抗癌中草药是研究的新方向。笔者在前期研究中发现，穿心莲内酯可以抑制人SKOV3、A431、HL-60细胞增殖，并可诱导SKOV3、A431细胞凋亡，其诱导凋亡可能与线粒体膜电位〔MMP〕下降有关［1-2］。本研究拟在前期研究的根底上，采用AnnexinV/PI双染法流式细胞术检测穿心莲内酯是否能诱导HL-60细胞凋亡、流式细胞术结合荧光染色检测穿心莲内酯对HL-60细胞细胞色素C〔CytC〕蛋白表达的影响。Annexin/PI双染法FCM检测结果发现，穿心莲内酯能促进HL-60细胞凋