微生物检测菌落总数测定方法.docx

微生物学检验菌落总数的测定之邯郸勺丸创作
创作时间：二零二一年六月三十日
1 原理
微生物活体数量的测定方法，
通过将样品制成均匀的一系列分歧稀释度的稀释液，再取一定的
稀释液接种，使其均匀分布于培养皿微生物学检验菌落总数的测定之邯郸勺丸创作
创作时间：二零二一年六月三十日
1 原理
微生物活体数量的测定方法，
通过将样品制成均匀的一系列分歧稀释度的稀释液，再取一定的
稀释液接种，使其均匀分布于培养皿中特定的培养基内，最后根
据在平板上长出的菌落数计算出每克（或mD样品中的活菌数量
2资料和仪器
平皿：© 90mm.
无菌锥形瓶：容量 250mL, 500mL.
无菌吸管：1mL （）,10mL （）或
微量移液器及吸头.
灭菌锅.
10倍系列稀释
涂棒.
酒精灯.
超净工作台.
磁力搅拌器.
漩涡振荡器
式
菌落总数的检验法式见下图.
10g样品+90mL无菌生理水，均质
方法①/\方法②
选择至少3个适宜样品稀释均液
各取1mL分别加入无菌培养皿中 每皿中加入15mL~20mL平板计数 琼脂培养基，混匀，凝固.
在培养皿中加入 15mL~20mL平板计数 琼脂培养基， ,涂布均匀.
4把持步伐
培养基和试剂的配制
平板计数琼脂培养基：LB培养基（最经常使用）
牛肉膏5g
卵白月东10g
氯化钠 5g
琼脂 20g
蒸储水1L
将上述成份加于蒸储水中，煮沸溶解，调节pH值，分装锥形
瓶中，121 C高压灭菌 30分钟.
无菌生理盐水的配制：
，121 C高压灭菌
30分钟.
样品的稀释：
固体样品： 称取10g固体样品置于盛有 90mL无菌生理盐 水的无菌锥形瓶中（内装数粒无菌玻璃珠）
, 在旋转式摇
床上 200r/min 充沛振荡 30min, 制成 1： 10 的样品均液,
即 101 稀释液 .
用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1: 10样品均液1mL （吸
取前需要摇匀 1： 10 稀释液） , 缓慢加入盛有9mL 无菌生
理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不能触及稀释
液面） , 用漩涡振荡器振荡, 混合均匀 , 制成 1： 100 的样
品稀释均液.
依照 把持法式 , 制备 10 倍系列样品稀释液, 每递
增稀释一次，换用一次1mL无菌吸管或吸头.
根据对样品活菌数量的估计, 选择 3~4 个适宜稀释度的样
品均液（比如 106, 107, 108, 109 稀释液） .
平板接种与培养
接种方法 1 ：
用 1mL 无菌吸管或微量移液器分别吸取分歧稀释度的菌悬液
1mL 于一个无菌培养皿中（每个稀释度做三个重复） , 再在培养
皿中分别倒入10〜15mL已融化并冷却至 45~50c的培养基，盖好
平皿盖子 , 趁热轻轻转动培养皿, 使菌液与培养基充沛混合均匀 ,
冷凝后在恒温培养箱中颠倒培养24〜2 8 h ,培养温度为 36℃± 1℃. 同时以无菌水作空白对比 .
注：比如1000亿CFU样品稀释梯