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培养基的配制及灭菌
培养基的配制及灭菌
1. 实验目的三角瓶，培养皿，试剂瓶，试管，枪尖盒等仪器的清洗。
2. 三角瓶棉塞的制作，三角瓶，吸管，培养皿，试剂瓶，试管，枪尖盒的包装与灭菌。
3. 高温蒸汽灭菌原理的学习onkey仪器：三角瓶，培养皿，试剂瓶，试管，枪尖盒，电子称，高压蒸汽锅，电炉，药匙，称量纸，量筒或搪瓷缸，烧杯，pH试纸。
1. 实验步骤仪器的清洗：
① 试剂瓶：自来水洗净，蒸储水洗两遍，重蒸水洗两遍。
② 三角瓶：自来水洗净，蒸储水洗两遍，沥干。
③ 培养皿：自来水洗净，沥干。
④ 试管和吸管：自来水洗净，沥干。
⑤ 枪尖盒：自来水洗净，蒸储水洗两遍，沥干。
2. 仪器的包装：
棉塞的制作：先取纱布，取纱布时确定纱布宽度后抽掉一根线，然后顺着先的方向撕纱布，再根据纱布的宽度和所撕下来的长度剪下大约为正方形的纱布三片，用于包棉花。根据三角瓶的口径大小，撕取大小适宜的棉花，棉花的完整面跟纱布接触，棉花碎片向里。将纱布正至于三角瓶口，再降棉花内侧用大拇指顶成窝状，向纱布塞棉花，大约三分之二处在管口内，然后再用纱布的四个角系住蓬松的棉花，使其成圆形。保证取出棉塞的时候可以听到“噗”一声。
① 三角瓶口，试剂瓶瓶口的包装：剪下大约正方形的牛皮纸抱住三角瓶口或试剂瓶瓶口，用绳子紧绕几圈，然后沿着绳子自身缠绕方向拧断绳子，系紧后包装完毕。
② 吸管及涂布器的包装：吸管的尾部要塞棉花，包装的时候从头部开始。注意包装角度不要太大也不要太小。（30°~45°最好。角度太小包装不紧，太大浪费纸），包装完后将尾巴打结。六只吸管捆扎在一起，做好标记后高压。高压后从尾巴打开。涂布器的包装与吸管类似。
③ 培养皿的包装：将培养皿10个摆成一排，保证每个皿的皿盖和皿身方向一致。用牛皮纸包扎的时候随时将两侧封口。滚动包装完后确保抛掷时培养皿不会散开。
④ 枪尖盒的包装：方法同礼盒的包装。
⑤ 试管的包装：,塞上橡胶塞，将六只试管捆扎在一起，试管口处用牛皮纸包好后用橡皮筋捆住。
3. 高压灭菌处理（老师讲过但并未动手操作）：
① 将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水
面与三角搁架相平为宜。
② 放回内层锅，并装入待灭菌，物品装入待灭菌物品的时候注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。
③ 加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
④ 通电加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。设置温度121C,等待灭菌完毕。
⑤ 当压力表的压力降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。
4. 培养基的配制及灭菌：
配方----称量----配制----调pH值----过滤（可省）-—分装-—火困1）LB培养基的配制：
①配方：LB液体培养基：1%蛋白月东，%酵母粉，
1%NaCJ用NaOH^,121C灭菌20min备用。
LB固体培养基：除以上LB培养基成分外，，121C灭菌20min备用。
② 称量（固体培养基3