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PH0316 | RIPA 裂解液(强)
RIPA Lysis Buffer (Strong)
Catalog No：PH0316 和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解 15～30min，通常裂解液作用于细胞 1～3 秒内，细胞就会被裂解。通常 6 孔板每
孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200～250μl。
4、 充分裂解后，10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清，即可进行后续的 PAGE、
Western 和免疫沉淀等操作。
5、 进行后续的 SDS-PAGE、 Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞
1、 取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室温溶解混匀，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、 低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。3、 用手指轻弹细胞，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 Enhanced
RIPA Lysis Buffer。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量
到 200～250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞，充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
4、 10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
5、 进行后续的 SDS-PAGE、 Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
（三）组织样品：
1、 取 Enhanced Lysis Buffer 置于室温溶解混匀 ， 加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、 把组织剪切成细小的碎片，越小越好。 取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程
尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。
3、 按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解 15-30min。
4、 步骤 3、 4 亦可以采用如下过程：按照每 20mg 组织加