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分光光度测量方法
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一、普通分光光度法

通常采用 A-C 标准曲线法定量测定。

⑴ 若各组分的吸收曲线互不重叠，则可分光光度测量方法
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一、普通分光光度法

通常采用 A-C 标准曲线法定量测定。

⑴ 若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组分测定没有区别。
⑵ 若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量。
Aλ1= εaλ1bca ＋ εbλ1bcb
Aλ2= εaλ2bca ＋ εbλ2bcb
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二、示差分光光度法（示差法）
普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。
设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs(cs < cx)。则：
Ax= εb cx
As = εb cs
ΔＡ＝Ａx －Ａs =εb(cx － cs ）=εbΔc
测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差ΔＡ。
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示差分光光度法（示差法）
ΔA＝Ax －As =εb(cx － cs ）=εbΔc
测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差ΔA 。
示差法测得的吸光度与Δc呈直线关系。由标准曲线上查得相应的Δc值，则待测溶液浓度cx ：
cx = cs + Δc
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示差法标尺扩展原理：
普通法： cs的T=10%；cx的T=5%
示差法： cs 做参比，调T=100%
则： cx的T=50% ；标尺扩展10倍
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三、双波长分光光度法
不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。
ΔA ＝Aλ2 －Aλ1 ＝ (ελ2 －ελ1)b c
两波长处测得的吸光度差值ΔA与待测组分浓度成正比。ελ1和ελ2分别表示待测组分在λ1和λ2处的摩尔吸光系数。
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关键问题:
测量波长λ2和参比波长λ1的选择与组合
以两组分x和y的双波长法测定为例：
设：x为待测组分，y为干扰组分，二者的吸光度差分别为:
ΔAx和ΔAy，则该体系的总吸光度差ΔAx+y为：
ΔAx+y = ΔA x + ΔA y
如何选择波长λ1 、λ2有一定的要求。
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选择波长组合λ1 、λ2的基本要求是：
⑴选定的波长λ1和λ2处干扰组分应具有相同吸光度，即： ΔAy = ΔA yλ2 － ΔA yλ1 = 0
故： ΔAx+y = ΔA x=(εxλ2－εxλ1)bcx
此时：测得的吸光度差ΔA只与待测组分x的浓度呈线性关系，而与干扰组分y无关。若x为干扰组分，则也可用同样的方法测定y组分。
可采用作图法选择符合上述两个条件的波长组合。
⑵在选定的两个波长λ1和λ2处待测组分的吸光度应具有足够大的差值。
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四、导数分光光度法
导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等方面，显示了很大的优越性。
利用吸光度(或透光度)对波长的导数曲线来进行分析：
Ｉ＝Ｉ0 e-εbc
假定入射光强度Ｉ0 在整个波长范围内保持恒定：
dI 0 /dλ＝0
则：dI/dλ＝－Ｉ0 bc e -εbc dε/dλ
＝－Ｉ0 bc dε/dλ
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导数分光光度法
dI/dλ ＝－Ｉ0 bc dε/dλ
一阶导数