实验四血凝和血凝抑制试验.ppt

实验四 血凝和血凝抑制试验（Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI）
徐晓娟
一、实验目的
二、实验原理
三、实验材料实验四 血凝和血凝抑制试验（Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI）
徐晓娟
一、实验目的
二、实验原理
三、实验材料
四、实验步骤
五、结果判定
了解血凝和血凝抑制试验的原理。
了解血凝价和血凝单位的概念。
掌握血凝和血凝抑制试验的操作步骤和结果判定的方法。
一、实验目的
二、实验原理（一）血凝试验（HA）
一些病毒能够促使动物如鸡、鹅、豚鼠和人的红细胞发生凝集，叫做血凝试验。
病毒凝集红细胞是一种较为普遍的现象，可以作为鉴定病毒的一个指标。
HA试验的原理图
一层RBC均匀铺在孔底者为++++；
基本同上，但边缘不整齐，有下坠倾向者为+++；
RBC在孔底形成一个环状，四周有小凝集块者为++；
RBC在孔底形成一个小团，但边缘不光滑，四周有小凝集块为+;
RBC在孔底形成一个小团，边缘光滑，四周有似小凝集块者为±;
红细胞在孔底形成一个小团，边缘光滑，整齐者为-。
++++ +++ ++ + -
血凝试验结果判定
1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1: 28 1: 29 1: 210 C C
血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。
（二）血凝抑制试验（HI）
当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞凝集抑制试验，即血凝抑制试验。
因此，可以用已知病毒来检测被检血清中的相应抗体，也可以用已知血清来鉴定未知病毒。
HA试验的原理图
HI试验的原理图
三、实验材料
鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（Lasota）接种鸡胚、收获尿囊液制备。
鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，以生理盐水洗涤3~5次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液使用。
%生理盐水。
被检血清，采自被检鸡的健康血清。
四、实验步骤（一）血凝试验（HA）
在血凝板第一排的1~12孔加入50μl生理盐水。
在第1孔中加入50μl病毒抗原，反复吸取混匀后吸50μl到第2孔，如此倍比稀释直到第10孔，混匀后弃50μl；最后两孔（11、12）为红细胞对照。
将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1~12孔中每孔加入50μl。
手工震荡，37℃静置25~30min后观察结果。
病毒液的血凝价是1:2？。
血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。
（二）血凝抑制试验（HI）
在血凝板的1~11孔加入25μl生理盐水，最后一孔（12孔）加50μl。
第1孔加待检血清25μl，混匀后吸25μl至第2孔，倍比稀释直至第10孔，混匀后弃25μl。
从1~11孔，每空加稀释好的25μl 4个血凝单位的病毒悬液。37 ℃静置25~30min
如果血凝价为1:28，那么4个血凝单位就是1:26
第11、12孔不加
第12孔不加
血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。
1个血凝单位：能使50%的红细胞发生凝集的病毒悬液。
病毒浓度
1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1: 28 1: 29 1: 210 C C
将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1~12孔中每孔加入50μl。
手工震荡，在37℃静置25~30min后观察结果。
结果判定：以红细胞凝集100%的抑制作为结果判定的终点。
血凝抑制价是1:2？，被检血清为阴/阳性。
≥1:24为阳性
＜1:22为阴性
＝1:23为可疑
血凝抑制价
第11孔为病毒对照，应该完全凝集，第12孔为细胞对照，应该完全沉积到孔底。
HA
HI
细胞对照
五、结果判定
血凝价是1：？；
血凝抑制价是1：？；
被检血清为阴性还是阳性?