植物花色苷含量试剂盒说明书.docx

植物花色苷含量试剂盒说明书
货号：MS1515 规格：100管/96样
植物花色苷含量试剂盒说明书
微量法
正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
花植物花色苷含量试剂盒说明书
货号：MS1515 规格：100管/96样
植物花色苷含量试剂盒说明书
微量法
正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
花色苷是一类易溶于极性溶剂的天然色素，属黄酮类化合物。花色苷广泛存在于植物的根、茎、叶、花和果实中，使其呈现由红到紫等不同颜色，是植物主要的呈色物质。
测定原理：
采用pH示差法测定花色苷含量，,而当pH ,花色苷转变为无色查尔酮形式,在530处无吸收峰, 利用此特性分别测定在不同pH 下的530nm和700nm处的吸光度值。pH示差法减少了溶液pH和溶剂差异的影响，排除了其他非花色苷类物质对检测结果的干扰。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体100 mL× 1瓶，4℃保存；
试剂一：液体20 mL× 1瓶，4℃保存；
试剂二：液体20 mL × 1瓶，4℃保存；
花色苷的提取：
按照烘干样品质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（，加入1mL提取液），充分匀浆后转移到EP管中，提取液定容至1 mL，盖紧后4℃浸提24 h，8000 g，常温离心10 min，取上清液待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上；试剂一和试剂二25℃（室温）预热10min以上；
2、取20 μL上清液和180 μL试剂一（相当于稀释10倍），40℃水浴20min，分别测定530nm 和700nm处的吸光值，分别记为A1和A2。
3、取20 μL上清液和180 μL试剂二（相当于稀释10倍），40℃水浴20min，分别测定530nm
和700nm处的吸光值，分别记为A3和A4。
4、计算△A=(A1-A2)-(A3-A4)
注意：如果A1大于1，可以适当加大稀释倍数，保证总体积200 μL不变，如10 μL上清液和190 μL 试剂一（相当于稀释20倍）；，可以适当缩小稀释倍数，保证总体积不变，如100 μL上清液和100 μL试剂一（相当于稀释2倍），~1范围内，可提高检测灵敏度；同样调