缓冲液地配制方法.docx

核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法
50XTAEBuffer()
组份浓度2MTris-醋酸，100mMEDTA
配制量1L
，置丁1L烧杯中
Tris
242g
N&EDTA•2H2O
3olFF
25mg
向离心管中加入约4ml的DEPC处理水后，充分搅拌溶解加入5ml的甘油（Glycerol）后，充分混匀。
用DEPC处理水定容至10ml后，室温保存。
四、核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法20XSSC
,•2H2O（柠檬酸钠）
配制量1L
，置丁lL烧杯中。
NaCl

Na3citrate•2H2O

，充分搅拌溶解。
3滴加14NHCl,，加去离子水将溶液定容至1L4.[Hj温局压火菌后，室温保存。
20xSSPEBuffer
,,

NaCl

NaH2PO4-H2O

Na2EDTA•2H2O

，充分搅拌溶解
，置于lL烧杯中。
（）。
加去离子水将溶液定容至lL。
[Hj温局压火菌后，室温保存。
50XDenhardt'S溶液组份浓
1%(W/V)
Ficoll400（菲口」400/水溶性聚蔗糖400）
1%(W/V)
Polyvinylpyrrolidone（聚维酮/聚乙烯毗咯烷酮）
1%(W/V)
BSA
，置丁500ml烧杯中
Flcoll400
5g
PoLyvlnylpyrrolldone
5g
BSA
5g
加去离子水约400ml,充分搅拌溶解加去离子水将溶液定容至500ml。
，分装成每份25ml-20C保存。

。
配制量lL
•7H2O置于lL烧杯中。
加入约800ml的去离子水充分搅拌溶解。
加入85%的H3PO4（浓磷酸）。
[Hj温局压火菌后，室温保存。
SalmonDNA（位鱼精DNA）
组份浓度10mg/mlSalmonDNA
配制量约100ml
，加入约200ml的TEBuffer。
2用磁力搅拌器室温搅拌2~4h,溶解后加入4ml的5MNaCl,。
用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。
回收水相溶液后，使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20次，以切断DNA。
加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。
离心回收DNA后，溶解丁100ml的去离子水中。测定溶液的OD260值计算溶液的DNA浓度后，稀释DNA溶液至10mg/ml。
煮沸10min后，分装成小份（1ml/份）。-20C保存。
使用前在沸水浴中加热5min后，迅速冰浴冷却。
,，置丁lL烧杯中
NaCl

NaOH
20g
向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解加去离子水将溶液定容至lL后，室温保存。
预杂交液/杂交液（DNA杂交用）
6X
SSC诚SSPE)
5X
Denhardt's
%(W/V)
SDS
100g/ml
SalmonDNA
，置丁200ml烧杯中
20xSSC诚SSPE)
30ml
50xDenhardt's
10ml
10%SDS
5ml
10mg/mlSalmonDNA
1ml
dH2O
54ml
，（RNA杂交用）组份浓度
6X
SSC俄SSPE)
5X
Denhardt's
%(W/V)
SDS
100g/ml
SalmonDNA
50%(V/V)
Formamlde
，置丁200ml烧杯中
20xSSC诚SSPE)
30ml
50xDenhardt's
10ml
10%SDS
5ml
10mg/mlSalmo