制川乌高压蒸法炮制工艺优化研究.doc

制川乌高压蒸法炮制工艺优化研究
摘要 [目的]对制川乌高压蒸法炮制工艺进行优化研究。[方法]选取影响制川乌质量的关键工艺步骤进行单因素试验,根据单因素考察的结果进行正交试验,以双酯型生物碱总量、单酯型生物碱总量为考察指标,得到并达到了工业化生产的要求,确保了制川乌产品质量的均一、稳定、可控。
1 材料与方法
材料
主要仪器。BSA225S-CW分析天平(德国赛多利斯集团);DMF-4B手提式高速中药粉碎机(浙江温岭市铭大药材机械设备有限公司);GZX-9070 MBE型数显鼓风干燥箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂);KSW型电阻炉温度控制器(上海博讯实业有限公司医疗设备厂);RV10控制型立式旋转蒸发仪[艾卡(广州)仪器设备有限公司];KQ-300DA数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);YXQ-LS-18SI压力蒸汽灭菌器(上海博讯实业有限公司医疗设备厂);UltiMate 3000型高效液相色谱仪(赛默飞世尔科技公司)。
试材。川乌药材产于四川江油,经广州中医药大学高明副教授鉴定为毛茛科植物乌头(Aconitum carmichaelii Debx.)的干燥母根;经检验其双酯型生物碱含量(即乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的总量)%、%、%、%,均符合《中国药典》2015年版规定。 主要试剂。异丙醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、氨水,AR,均购自广州化学试剂厂;乌头碱(批号110720-201111)、次乌头碱(批号110798-201308)、新乌头碱(批号110799-201608)、苯甲酰乌头原碱(批号111794-201102)、苯甲酰次乌头原碱(批号111796-201303)、苯甲酰新乌头原碱(批号111795-201303),均购自中国药品生物制品检定研究所。
方法
对照品溶液的制备。取苯甲酰乌头原碱对照品、苯甲酰次乌头原碱对照品、苯甲酰新乌头原碱对照品、乌头碱对照品、次乌头碱对照品及新乌头碱对照品适量,精密称定,加异丙醇-三氯甲烷(1∶1)混合溶液制成每1 mL含苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱各50 μg、 mg的混合溶液及每1 mL含乌头碱50 μg、 mg的混合溶液,即得[10-12]。
供试品溶液的制备。取制川乌粉末(过3号筛)约2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加氨试液3 mL,精密加入异丙醇-乙酸乙酯(1∶1)混合溶液50 mL,称定重量,超声处理(功率300 W,频率40 kHz;水温在25 ℃以下)30 min,放冷,再称定重量,用异丙醇-乙酸乙酯(1∶1)混合溶液补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液25 mL,40 ℃以下减压回收溶剂至干,残渣精密加入异丙醇-三氯甲烷(1∶1)混合溶液3 mL溶解,滤过,取续滤液,即得[10-12]。
色谱分析条件。色谱柱:資生堂Superiorex ODS( mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈-四氢呋喃(25∶15)(A)- mol/L醋酸铵溶液(每1 000 mL)(B),梯度洗脱(0~48 min,15%~26% A;48~49 min,26%~35% A;49~58 min,35% A;58~65 min,35%~15% A); mL/min;检测波长235 nm;柱温27 ℃;进样量10 μL。理论板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于2 000。
方法学考察。
线性关系的考察。取“”项下的对照品溶液,分别按照“”方法进样2、4、6、10、15、20 μL,记录色谱图,以进样浓度X(μg/mL)为横坐标、峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线,计算线性回归方程。
稳定性试验。取按“”方法制备的供试品溶液6份,按“”色谱分析条件分别于0、2、4、6、8 h进样,进样量10 μL,测定乌头碱等6个物质的峰面积积分值,计算RSD。
精密度试验。取按“”方法制备的对照品溶液,按“”色谱条件连续进样6次,计算乌头碱等6个物质峰面积的RSD值。
重复性试验。取按“”方法制备的供试品溶液6份,按“”色谱分析条件进样,进样量为10 μL,测定乌头碱等6个物质的峰面积,计算RSD。
加样回收试验。取按“”方法制备的供试品溶液6份