细胞生物实验报告 - 图文.docx

细胞生物实验报告 - 图文



细 胞 生 物 学
实 验 论 文
年级：：肝素、完全RPMI—1640造就粉、秋水仙素、、植物血球凝集素〔PHA〕、青霉素、链霉素、小牛血清、秋水仙素、无水酒精、冰醋酸、Giemsa粉末、甘油、甲醇、1/15 mol/。











①接种和造就：在无菌工作台上，翻开造就瓶的瓶塞，参加3ml造就基，然后再参加母液为5mg/mL PHA男1女1各加45ul使其终浓度为75ug/ml，男2女2各加50ul使其终末浓度处于83ug/ml,，轻轻摇匀 ，置37 ℃ 造就箱中造就73h 。
②造就细胞的秋水仙碱处理：造就终止前3h~4h将别致配制的50μg／mL秋水仙素工作液注入造就瓶中，，轻轻摇匀，放回造就箱中，接着造就至73h。
①低渗及离心：当心从造就箱取出造就瓶，用吸管将造就后的血细胞混匀，并移至离心管内，以1010r／min离心10min，吸弃上清液，参加8mL37 ℃／L氯化钾低渗液，用吸管上下吹打约10次，使细胞悬浮于低渗液中，置37 ℃ 水浴箱中，温育20min，，使低渗充分。
②固定：低渗终止后，参加别致配制的卡诺固定液〔甲醇：冰醋酸＝3:1〕1mL，预固定2min ，打匀，放入离心机内，以1010 r／min离心 8分钟min，倒掉上清液，接着参加固定液5mL，用吸管将沉淀的细胞轻轻吹打混合细胞悬液。室温下静置20min，以 1010r／min离心 8min，倒掉上清液。










③重复固定：再参加固定液５mL，用吸管将沉淀的细胞轻轻吹打成混合细胞悬液，室温下静置20min ，以1010r／min离心8min，倒掉上清液 。 ④制片：，用吸管轻轻吹打成混合细胞悬液。滴片时，，每片2~3滴，随即对准玻片吹一口气，以帮助细胞的分散，然后在乙醇灯火焰上方过火5秒，最终在烘箱中烘干。
⑤染色：将晾干的玻片标本用Giemsa染液染色20min〔〕，自来水缓缓冲洗玻片，并烘干，镜检。
⑥结果视察：取制备好的安康人体染色体标本，先用低倍镜视察，选择染色


体分散良好、无重叠的分裂中期细胞，转换油镜下细致视察分析。
①找好的染色体：在显微镜下找出染色体分散良好、长度适中、姐妹染色单体清晰的中期分裂相进展显微拍摄并确定数目：２n＝４６
②拍照分剪：将显微拍摄放大的照片上的一个细胞的全部染色体分别一条一条剪下。
③测量与计算: ① 将照片上的染色体进展编号, 用直尺测量每一染色体的长度, 此长度为其肯定长度。②计算每一染色体的相对长度, 即每条染色体的长度除以全部染色体的总长度。③测量染色体短臂和长臂的长度, 并求出其臂比, 即长臂长/ 短臂长。④将测量的数据记入表相应栏内










④配对: 依据染色体的相对长度、臂比、次缢痕的有无和位置、形态大小, 随体有无, 着丝点位置, 将其一样表型的染色体从照片上剪下来, 将其同源染色体配成对。
⑤排列：染色体的排列通常是从大到小, 按长度依次编号, 等长的染色体, 把短臂长的放在前面