各种DNA提取方法.pdf

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中国生物电泳网 专业销售维修：各种 电泳槽/ 1000ml，高压灭菌。
ACD 抗凝剂：柠檬酸 柠檬酸钠 葡萄糖 ；最后加灭菌去
离子水至 350ml，高压灭菌。
提取缓冲液（Extractionbuffer）：
10mMTrisCl(PH=)(PH=)(PH=)
EDTA(PH=)%SDS10%；最后加灭菌去离子水至 100ml，
高压灭菌
试验步骤：
1、在 500μl 抗凝血中加入 ligsisbuffer1000μl，充分颠混至清亮。以 4000rpm，
离心 5min。弃上清液。
2、沉淀中加入 ligsisbuffer1500μl，充分匀浆。以 6000rpm，离心 5min。
3、彻底弃去上清，加入 extractionbuffer500μl（裂解细胞），混匀置于 37
℃，水溶 1h。
4、加入 8μl 的蛋白酶 K，颠混，37℃过夜（或 55℃，3h，但是 37℃效果
要好些）。
5、每管加入 450μl 饱和酚（取溶液下层）缓慢摇晃 10min，以 5500rpm，
离心 15min。
6、取上清，每管加入 250μl 饱和酚和 250μl 氯仿－异戊醇，摇匀 10min，
以 5500rpm，离心 15min。
7、取上清，每管加入 500μl 氯仿－异戊醇，摇匀 10min，以 5500rpm，离
心 15min。
8、取上清，每管加 50μl 的 3M 的 NaAC＋，适量无水乙醇（预冷）至满，
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摇匀放入-20℃保存 2h 以上。
9、以 12000rpm，离心 20min。去上清，加入 70％乙醇 500μl，以 12000rpm，
离心 5min，去上清，50－60℃干燥。
10、加入 50μl 灭菌去离子水，转弹，混匀。
四，NaI 提取法提取外周血白细胞基因组：
实验步骤：
1、取外周抗凝血（ 全 血）100ul 于 eppendorf 管中，12000rpm 离心 12min。
2、弃上清，加双蒸水 200ul 溶解，摇匀 20s。
3、混匀后加 6MNaI 溶液 200ul，摇匀 20s。
4、加入氯仿/异戊醇（24：1）400ul，边加边摇，摇匀 20s，12000rpm 离
心 12min。
5、取上层液 350ul，加入另一新 eppendorf 管中，加 倍体积异丙醇，
摇匀 20s，室温放置 15min，静置后的反应体系 15000rpm 离心 12min，使沉淀
紧贴 eppendorf 管壁。
6、弃异丙醇，加 70％乙醇 1ml（不振动），以 15000rpm 离心 12min。
7、弃乙醇，敞开 eppendorf 管盖，烘干（37℃恒温箱）后，加 1xTE 溶液
30ul，溶解 DNA